医学微生物学 （二）致病性1.致病物质 (3)假膜性结肠炎(pse ud ome mbran o u s colitis):5％的C DI病人，可出现血水样腹泻，排出假膜，并伴有发热、白细胞增多等全身中毒表现，严重者可危及生命。 第二节无芽胞厌氧菌 与人类疾病有关的无芽胞厌氧菌，主要寄生于人和动物的体表及与外界相通的腔道黏膜表面，构成入体的正常菌群，包括革兰阳性和革兰阴性的球菌和杆菌。在人体正常菌群中，无芽胞厌氧菌占有绝对优势，是其他非厌氧性细菌（需氧菌和兼性厌氧菌）的l0~1000倍。例如在肠道菌群中，厌氧菌占99.9%，大肠埃希菌等只占0.1%。皮肤、口腔、上呼吸道和泌尿生殖道黏膜的正常菌群中，80%~90％为无芽胞厌氧菌。一般情况下，它们对人体无害；但在某些特定条件下，这些厌氧菌作为机会致病菌可导致内源性感染。临床上以口腔、胸腔、腹腔和盆腔感染为多见，无芽胞厌氧菌占这些部位感染的70%-93%，且以混合感染为多见。


医学微生物学 学菌细 —、生物学性状无芽胞厌氧菌有30多个菌属，200余菌种，其中与人类疾病相关的主要有10个属（表12-1)。表12-1与人类疾病相关的主要无芽胞厌氧菌革兰阴性革兰阳性普雷沃菌属口腔、阴道双歧杆菌属肠道紫单胞菌属口腔真杆菌属口腔和肠道梭杆菌属口腔、直肠乳杆菌属口腔、肠道Fusobacteri-和阴道Lactobacillus和阴道um1.革兰阴性厌氧杆菌临床上最常见的革兰阴性厌氧杆菌中，以类杆菌属中的脆弱类杆菌(B.frag心）最为重要。在无芽胞厌氧菌感染中，其占临床厌氧菌分离株的25%，类杅菌分离株的50%。该菌的形态特征为两端钝圆而浓染、中间着色浅似空泡状，有荚膜（图12-4)。类杆菌有典型的革兰阴性菌细胞壁，但其脂多糖无内毒素活性，主:?J要因为其氨基葡萄糖残基上缺乏磷酸基团且结合的脂肪酸较少。梭杆菌属细菌两端尖细、中间膨胀.


医学微生物学 成梭形。其余菌属形态都非常小。除类杆菌在培养基上生长迅速外，其余均生长缓慢，需3天以上。守－j户~2.革兰阴性厌氧球菌以韦荣球菌属最重要，其他革兰阴性球菌仍难以分离。韦荣球菌属细菌 直径0.3~0.5µm，常成对、成簇或短链状排列；在临床分离的厌氧菌标本中，分离率小千1%，且为混图12-4脆弱类杆菌（光镜x1000)合感染菌之一。3革兰阳性厌氧杆菌在临床厌氧菌分离株中约占22%，其中57％为丙酸杆菌，23％为真杆菌。


医学微生物学 成梭形。其余菌属形态都非常小。除类杆菌在培养基上生长迅速外，其余均生长缓慢，需3天以上。守－j户~2.革兰阴性厌氧球菌以韦荣球菌属最重要，其他革兰阴性球菌仍难以分离。韦荣球菌属细菌 (1)双歧杆菌属：菌体呈多形性，细菌单个或排列成V形、星形或棒状，染色不均匀。双歧杆菌在婴儿、成入肠道菌群中占很高比例，在婴儿尤为突出，构成体内的生物屏障并发挥生物拈抗作用，合成多种维生素、延缓衰老并增强机体免疫力。只有齿双歧杆菌(B. dentium)与龋齿和牙周炎有关，但其致病机制仍不明确。(2)乳杆菌属：因发酵糖类产生大量乳酸而命名，寄居在口腔、肠道和阴道，对侵入这些部位的病原菌的繁殖有抑制作用。嗜酸乳杆菌(L. acidoph i l us)与龋齿密切有关。(3)丙酸杆菌：因能发酵葡萄糖产生丙酸而命名。与人类疾病有关的有3个菌种，座疮丙酸杆菌菌体细长，单个或排列呈V、Y或棒状，20％胆汁可促进其生长，生化反应不活泼。


医学微生物学 成梭形。其余菌属形态都非常小。除类杆菌在培养基上生长迅速外，其余均生长缓慢，需3天以上。守－j户~2.革兰阴性厌氧球菌以韦荣球菌属最重要，其他革兰阴性球菌仍难以分离。韦荣球菌属细菌 4革兰阳性厌氧球菌有临床意义的是消化链球菌属，菌体小，直径为0.5-0.6µm，常成对或短链状排列。在血琼脂平板上形成灰白色、不溶血的光滑型小菌落。在临床厌氧菌分离株中，约占20%-35%，为第2位，仅次于脆弱类杆菌，但大多亦为混合感染。厌氧菌菌血症仅1％由革兰阳性球菌引起，主要为本菌属，常因女性生殖道感染而引起。 4.所致疾病 (1)败血症：随着抗厌氧菌抗生素的广泛应用，近年来临床败血症标本中厌氧菌培养阳性率只有5％左右多数为脆弱类杆菌，其次为革兰阳性厌氧球菌。原发病灶约50％来自胃肠道，20％来自女性生殖道。病死率为15%-35%。


医学微生物学 4.所致疾病 (2)中枢神经系统感染：最常见的为脑脓肿，主要继发于中耳炎、乳突炎和鼻窦炎等邻近感染，亦可经直接扩散和转移而形成。分离的细菌种类与原发病灶有关，革兰阴性厌氧杆菌最为常见。(3)口腔感染：主要引起牙髓炎、牙周炎和牙跟脓肿等。常由革兰阴性厌氧杆菌引起，核梭杆菌(F. nucleatum)和普雷沃菌属占主导地位。(4)呼吸道感染：无芽胞厌氧菌可感染上、下呼吸道的任何部位，如扁桃体周围蜂窝织炎、吸入性肺炎、坏死性肺炎、肺脓肿和脓胸等。无芽胞厌氧菌的肺部感染发生率仅次于肺炎链球菌。呼吸道感染中分离最多的厌氧菌为普雷沃菌属、坏死梭杆菌(F. necrophorum)、核梭杆菌、消化链球菌和脆弱类杆菌等。(5)腹部感染：因手术、损伤、穿孔及其他异常导致肠内容物污染腹腔为常见，因肠道含有大量的厌氧菌，因此感染以混合感染为主，主要细菌为脆弱类杆菌。腹腔内感染早期表现为腹膜炎、腹腔脓肿，部分伴菌血症。40%-60％的肝脓肿为厌氧菌所致，主要为类杆菌、梭杆菌等。25%~90％的阑尾炎由脆弱类杆菌所致；因结石阻塞所致胆襄炎则以厌氧链球菌为主。


医学微生物学 4.所致疾病 (6)女性生殖道与盆腔感染：手术或其他并发症引起的女性生殖道一系列严重感染中，如盆腔脓肿输卵管卵巢脓肿、子宫内膜炎、脓毒性流产等，无芽胞厌氧菌是主要病原体，脆弱类杆菌占病原菌的60％以上。因阻塞引起的泌尿道感染亦以无芽胞厌氧菌为主。 (7)其他：尚可引起皮肤、软组织感染和心内膜炎等。三、微生物学检查法 1.标本采取对临床诊断非常关键。标本应注意避免局部环境中正常菌群的污染，且一切可能污染正常菌群的标本均不宜进行厌氧菌分离鉴定，如咽拭子、痰液和阴道分泌物等。最可靠的标本是血液、无菌切取或活检得到的组织标本、从感染深部吸取的渗出物或脓汁等。厌氧菌大多对氧敏感，标本采取后应立刻放入特制的厌氧标本瓶中，并迅速送检。 （范雄林） 分枝杆菌属(Mycobacterium)归属放线菌目、分枝杆菌科，是一类细长略弯曲的杆菌，因呈分枝状排列而命名。分枝杆菌属的细菌很多，根据其致病特点，大致可分为结核分枝杆菌复合群、麻风分枝杆菌和非结核分枝杆菌三类。结核分枝杆菌复合群引起人类或动物结核病；麻风分枝杆菌引起麻风病；非结核分枝杆菌大多不致病，有些为条件致病菌。


医学微生物学 （范雄林） 分枝杆菌属的共同特性为：心基因组中G+C的百分比高，介千62%-70%；＠细胞壁中含有大量脂质，超过菌体干重的20%，故生长形成粗糙的疏水性菌落，且细菌难以被一般染料染色，需用助染剂并加温使之着色，而着色后又不易以含有3%HCl的乙醇脱色，故也称为抗酸杆菌(acid-fast bacilli)，是该属细菌与其他种属细菌的重要区别；＠无鞭毛、无芽胞，也不产生内、外毒素，脂质是其主要致病物质；＠生长缓慢，代时为2~20小时心所致感染多为慢性感染过程，可形成特征性的肉芽肿。


医学微生物学 第一节结核分枝杆菌 结核分枝杅菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex)包括结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌和田鼠分枝杆菌。结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)是导致人类结核病(tuberculosis, TB)最重要和最常见的病原体，可侵犯全身各器官系统，以肺部感染最多见。牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)的形态、染色、菌体结构及毒力等与结核分枝杆阅相似，可引起牛、人及其他动物的结核病，其所致人类结核病约占总病例数的6%~11%。非洲分枝杆菌是一种在非洲热带国家引起人类结核病的病原。田鼠分枝杆菌可引起野鼠的全身性结核，以及豚鼠、兔子和牛的局部病变。结核病是目前全球尤其是发展中国家危害最为严重的慢性传染病之一。据WHO报告，2016年全球约有1040万新发病例，病死人数约167万；是全球前10位致死病因之一，也是细菌性疾病致死的首位原因。中国是全球30个结核病高负担国家之一。


医学微生物学 —、生物学性状(—)形态与染色 结核分枝杆菌菌体细长略弯曲，大小约1~4µm x0.4µm，呈单个、分枝状或团束状排列，无鞭毛、无芽胞，有菌毛。在电镜下可看到菌体外有一层较厚的透明区，为微荚膜，在静置培养状态下和感染机体内容易形成。结核分枝杆菌为革兰阳性菌，但不易着色，一般常用齐－尼抗酸染色(Zi e hl-N ee l se n acid-fast s t a ining)：以5％苯酚复红辅以加温方式使细菌着色，然后用3％盐酸乙醇脱色，再用亚甲蓝复染。结核分枝杆菌可抵抗盐酸酒精的脱色作用而染成红色，而其他细菌及细胞被染成蓝色。细胞壁结构较为复杂，含有大量脂质，可占细胞壁干重的60％以上，脂质大多与阿拉伯糖和甘露糖结合组成糖脂(glycolip过），形成可通透的疏水性屏障，与细菌抗药性及毒力密切相关。从内向外由肤聚糖～阿拉伯半乳聚糖－分枝菌酸组成复合物(mAGP)，无革兰阳性菌的磷壁酸，而有与革兰阴性菌类似的外膜层。外膜内层为分枝菌酸，外层为不同类型的糖脂如海藻糖6,6'－二分枝菌酸(TDM)和硫酸脑昔脂(sulfatide)，或磷脂(phosphatide)等形成脂质双层结构。另外还有一些结合于细胞膜并延伸到细胞表面的脂甘露聚糖(lipomannan)及其修饰物，如脂阿拉伯甘露聚糖(lipoarabinomannan, LAM)、末端修饰甘露糖的脂阿拉伯甘露聚糖(ManLAM)和磷脂酰肌醇甘露糖昔(phosphatidyl-myo-inositol maimoside, PIM)。（二）培养特性与生化反应结核分枝杆菌为专性需氧菌，营养要求高。在含有蛋黄、马铃薯、甘油、无机盐、孔雀绿和天门冬酰胺等的改良罗氏培养基上生长良好。最适pH为6.5-6.8，最适溫度为37°C，低于30°C或高于42°C不生长。该菌生长缓慢，约12~24小时繁殖一代，接种后培养3~4周才出现肉眼可见的菌落。菌落干燥、坚硬，表面呈颗粒状、乳酪色或黄色，形似菜花样。在液体培养基中呈菌膜、束状或团块状生长，若在液体培养基内加入水溶性脂肪酸，可降低结核分枝杆菌表面的疏水性，细菌呈均匀分散生长，有利于进行药物敏感试验等。


医学微生物学 —、生物学性状(—)形态与染色 生化反应是鉴别分枝杆菌属菌种的关键。结核分枝杆菌可将硝酸盐还原成亚硝酸盐，合成烟酸，对咄唉酰胺敏感，而对嗟吩－2－轻酸酰阱不敏感；牛分枝杆菌不具备上述特性，但两者的中性红实验均为阳性。结核分枝杆菌的热触媒实验阴性，抗煮沸实验阳性，能耐煮沸10分钟，甚至高压灭菌亦不失去抗酸性；非结核分枝杆菌热触媒实验则为阳性，煮沸1分钟即失去抗酸性，且中性红实验阴性。 （三）抵抗力 结核分枝杆菌的脂类含量高，对某些理化因素的抵抗力较强。在干痰中可存活6~8个月，若黏附千尘埃上，可保持传染性8~10天。在3%HCI、6%H2S04或4%NaOH溶液中能耐受30分钟，因而临床上常以酸碱处理严重污染的样本，杀死杂菌和消化黏稠物质，以提高检出率。但是其对湿热、紫外线、乙醇的抵抗力弱。在液体中加热62-63"C15分钟或煮沸、直射日光下2~3小时、75％乙醇内数分钟即死亡。


医学微生物学 （四）变异性 结核分枝杆菌可发生形态、菌落、毒力及耐药性等变异。在陈旧病灶和临床标本中的结核分枝杆菌形态常不典型，可呈颗粒状，串珠状，短棒状，长丝形等。结核分枝杆菌在一些抗生素、溶菌酶的作用下，可失去细胞壁结构而变为L型细菌，其菌落也可由粗糙型变成光滑型。结核分枝杆菌在人工培养基上长期连续传代，其毒力可减弱。结核分枝杆菌对异烟阱、链霉素、利福平等药物较易产生耐药性变异；耐药类型可分为四类：单耐药(s in gle drug-resistant tuberculosis, SDR-TB)，对1种抗结核药物耐药；多耐药(polydru g-resistant tuberculosis, PDR-TB)对1种以上的抗结核药物耐药，不包括同时对异烟阱和利福平耐药；耐多药(multidrug-r esistant tuberculosis, MDR-TB)，至少对异烟阱和利福平耐药；广泛耐药(exten sively dm g-resistant tuberculosis, XDR-TB)，耐多药且对任意1种哩诺酮类药物耐药和二线抗结核药物卷曲霉素、卡那霉素和阿米卡星注射剂中至少1种耐药。


医学微生物学 （一）致病物质 1脂质(lipid)是结核分枝杆菌的主要毒力因子，多呈糖脂或脂蛋白形式。糖脂种类多，与C型凝集素受体(C-type lect in recep tors, CLR)结合，既具有佐剂活性、构成弗氏完全佐剂的重要部分，也是机体免疫反应的重要调节因素。海藻糖6,6'－二分枝菌酸(TDM)是一种可导致细菌在液体培养基中紧密黏成索状的物质，故也称为索状因子(c ord fa c tor)，是结核分枝杆菌重要的致病因子。TDM与巨噬细胞诱导型C型凝集素受体(M incle)结合，诱导抗炎细胞因子如IL-1和TNF-a.的产生，促进肉芽肿形成。TDM还可促进抗原提呈细胞成熟，激活Thl和Thl7反应，具有佐剂特性；但因细菌寄生在细胞内，相对于外环境胞内有丰富的葡萄糖，细菌会合成葡萄糖－单分枝菌酸(glucose monomycolate)取代TDM,Mincle识别该物质的能力较弱，是细菌免疫逃避的一种策略。此外，在潜伏感染状态下，细菌会优先合成甘油－单分枝菌酸(glycerolmonomycolate)，诱导Th2型反应，从而有利千形成潜伏感染和细菌在入体内的长期存活。脂阿拉伯甘露糖(LAM)、脂阿拉伯甘露聚糖(ManLAM)和磷脂酰肌醇甘露糖昔(PIM)等甘露糖脂，可结合巨噬细胞甘露糖受体(mannose receptor)，帮助细菌进入细胞内，抑制吞噬体成熟，阻止巨噬细胞的杀伤，并诱导抗炎细胞因子如TNF-a.的产生，导致机体发热、消瘦、体重下降和组织坏死；或与树突状细胞表面的DC-SIGN结合，促进IL-10的表达，在感染早期可抑制致敏T细胞从淋巴结移行到肺脏的感染灶，有利千细菌在感染灶的繁殖。硫酸脑旮脂可抑制吞噬细胞中的吞噬体与溶酶体融合，使结核分枝杆菌在细胞内存活。磷脂能刺激单核细胞增生，促使病灶内的巨噬细胞转变为上皮样细胞而形成结核结节，并与干酪样坏死有关。


医学微生物学 （一）致病物质 2.蛋白质结核分枝杆菌标准株H37Rv的全基因组测序结果显示，其基因组大小为4.38~4.42Mb，编码3590~4189个蛋白。多为脂蛋白或糖蛋白，致病作用较为广泛。如ESX-1型分泌系统是结核分枝杆菌和牛分枝杆菌特有的VII型分泌系统，以分泌培养滤过性蛋白(lOkD culture filtrate prot e in, CFP-10)和早期分泌抗原靶蛋白(6kD early secretory antigenic target protein,ESAT-6)为特征，包括编码基因及十余种分泌调节基因。ESAT-6和CFP-10形成复合物，与细菌免疫逃逸及诱导超敏反应有关。DosR-Do sS基因调节区编码48个蛋白质，与细菌适应肉芽肿内缺氧、低酸等条件下的生存有关。复苏促进因子(RPF)A~E与潜伏感染后细菌的再激活有关。结核菌素(tub erc ulin)是将细菌接种千液体培养基培养，收集培养滤液制备，主要是细菌分泌的蛋白质且耐热的成分，与具有佐剂活性的糖脂结合，能引起较强的迟发型超敏反应。


医学微生物学 （一）致病物质 3.荚膜结核分枝杆菌荚膜的主要成分是多糖，包括葡聚糖、阿拉伯甘露聚糖、甘露糖等，还含有部分脂质和蛋白质。荚膜与细菌黏附与入侵细胞、抵抗吞噬及其他免疫因子杀伤、或耐受酸碱有关。 三、免疫性 人类对结核分枝杆菌的感染率很高，但发病率却较低，这表明人体的固有免疫和适应性免疫在抵抗结核分枝杆菌的感染中具有重要作用。（一）固有免疫固有免疫是机体抗结核分枝杆菌感染的第一步，参与其中的细胞主要是巨噬细胞、树突状细胞(DC)、中性粒细胞和自然杀伤细胞(NK)。这些固有免疫细胞通过表面模式识别受体(pattern recognition receptor, PRR)识别细菌，包括Toll样受体(Toll like receptor, TLR)、Nod样受体(Nod like receptor, NLR)、C型凝集素受体(CLR)、补体受体、清道夫受体等。PRR激活后将不同信号传递到胞内，经级联放大，诱导细胞各种防御性固有免疫反应，如吞噬、自噬、凋亡和炎症小体的激活。另一方面，结核分枝杆菌也可通过自身的毒力抑制固有免疫应答，逃避固有免疫的杀伤。


医学微生物学 （二）适应性免疫 真菌侵入机体，可刺激机体的免疫系统，产生适应性免疫应答。其中以细胞免疫为主，同时可诱发迟发型超敏反应。1细胞免疫真菌感染与细胞免疫有较密切的关系。研究表明，Thl应答占优势的细胞免疫应答在杭探部真菌（如白假丝酵母、新生隐球菌）感染中起重要作用。Thi细胞产生IFN?、IL-2等激活巨噬细胞，上调呼吸爆发作用，增强其对真菌的杀伤力。CD4+Thl还可诱发迟发型超敏反应，控制真菌感染的扩散。AlDS、恶性肿瘤或应用免疫抑制剂者其T细胞功能受抑制，易并发播散性真菌感染。


医学微生物学 四、微生物学检查法 (—)病毒分离培养可采集发病初期病人的血清或脑脊液用细胞培养法或乳鼠脑内接种法分离培养乙脑病毒，但阳性率不高。病毒的鉴定可采用观察细胞病变、红细胞吸附试验、病毒中和试验、免疫荧光试验或基因分析等方法。（二）病毒抗原检测可用免疫荧光或ELISA检测发病初期病人血液或脑脊液中的乙脑病毒抗原，阳性结果对早期诊断有重要意义。（三）血清学试验血清学试验包括用血凝抑制试验、ELISA等检测特异性抗体。乙脑病毒特异性IgM抗体一般在感染后4天开始出现，2～3周达高峰，采用IgM抗体捕获的ELISA检测病人血清或脑脊液中的特异性IgM抗体，阳性率可达90％以上，因此可用千早期快速诊断。乙脑病毒特异性IgG抗体检测通常需检测急性期和恢复期双份血清，当恢复期血清抗体效价比急性期升高4倍或4倍以上时，才有诊断价值。 （二）分离培养 将待检样品经浓缩集菌后，接种于改良罗氏固体培养基，培养基所含的孔雀绿可抑制杂菌生长，37'C培养4~8周直至可见菌落生长。依据生长速度和菌落特点，可初步判定为结核分枝杆菌，再进一步用染色法和生化反应证实。


医学微生物学 （二）分离培养 BacterTB-460系统是结核分枝杆菌快速培养系统：在结核分枝杆菌专用培养基中加入含有14c的棕桐酸底物，样品接种后，如有结核分枝杆菌生长、繁殖，14c棕桐酸降解后产生带有放射性的14CO2'经仪器检测显示结果。该法敏感性较常规法高10％左右，检出时间缩短到2~3周。 （三）动物试验 常用豚鼠或地鼠鉴别疑似结核分枝杆菌的分离培养物以及进行毒力测定。取经浓缩集菌处理的样本1ml注射于豚鼠或地鼠腹股沟皮下，经3~4周饲养观察，如出现局部淋巴结肿大，消瘦或结核菌素试验阳性，可及时剖检；若观察6~8周后仍未见发病者，也要剖检。剖检时应注意观察淋巴结、肝、脾、肾等脏器有无结核病变，并可进行涂片染色镜检或分离培养鉴定。 （四）药物敏感试验 结核分枝杆菌耐药性的自发突变率较高，临床上耐药菌株流行广泛。美国CDC推荐对所有病人的分离菌株进行药敏性试验，以便对化疗作出预期的效果评价。对涂片阳性病人的治疗持续3周以后，痰涂片仍为阳性者，需重复药敏试验。


医学微生物学 （五）基因检测 基因检测快速、标准化、高通量，且对实验室生物安全要求较低。PCR检测结核分枝杆菌DNA的灵敏度高，每毫升检材中含有10~100个活菌即可检出，因此可用千结核病的早期快速诊断。结核分枝杆菌耐药与基因突变密切相关，分子（基因型）诊断技术有助千耐药结核病检测。WHO推荐使用XpertMTB/RIF试验进行结核病快速诊断，该方法以全自动半巢氏实时PCR技术为基础，以rpoB基因为靶基因，可在2小时内同时检测结核分枝杆菌和利福平耐药。此外，分枝杆菌16S rRNA高变异区序列测定、限制性长度多态性分析(RELP)等分子生物学技术已成功用于分枝杅菌的鉴定。


医学微生物学 （六）免疫学检查 1结核菌素试验人感染结核分枝杆菌后，产生免疫力的同时也会发生迟发型超敏反应。结核菌素皮肤试验(tub ercu lin skin test, TST)就是根据这一原理设计而成。目前该试验采用的结核菌素为纯蛋白衍生物(p urifi ed protein derivative, PPD)，是由旧结核菌素(old tuberculin, OT，为含有结核分枝杆菌的甘油肉汤培养物加热过滤液，主要成分是结核蛋白）经三氯醋酸沉淀后的纯化物；PPD有两种，即PPDC和BCGPPD，分别由结核分枝杆菌和卡介苗提取，因此TST也称为PPD试验。取5单位PPD注入受试者左前臂掌侧前1/3中央皮内，72小时(48~96小时）后查验，注射部位l吓红肿硬结直径<5mm或无反应者为阴性;>5mm者为阳性;""'15mm者或局部出现双圈、水泡、坏死及淋巴管炎者为强阳性。阳性反应表明卡介苗接种成功，或未接种卡介苗和非结核分枝杆菌流行地区结核分枝杆菌感染。强阳性反应则表明可能有活动性结核病，尤其是婴儿。需要注意的是，在原发感染早期、患严重的结核病或患其他严重疾病致细胞免疫功能低下者（如艾滋病病人、肿瘤病人或用过免疫抑制剂者），可能出现阴性反应。结核菌素试验可用于婴幼儿的结核病诊断、卡介苗接种效果测定和结核分枝杆菌感染的流行病学调查，还可用于肿瘤病人细胞免疫功能测定。


医学微生物学 （六）免疫学检查 2. IFN-y释放试验结核分枝杆菌感染后，体内存在抗原特异性的记忆性T细胞，当再次遇到抗原剌激时，能迅速活化增殖，产生多种细胞因子，其中IFN－丫是关键的细胞因子。IFN－丫释放试验(inte如ron-gamma release assay, IGRA)是一种用于结核病体外免疫检测的新方法。该方法是以结核分枝杆菌与卡介苗的差异蛋白ESAT-6和CFP-10多肤刺激致敏的T淋巴细胞分泌IFN－丫，通过酶联免疫斑点试验(enzyme linked immunospot assay, ELISPOT)进行检测，1~2天即可获得结果，具有敏感度和特异度高的优点。IGRA对鉴别潜伏结核病感染与卡介苗接种后反应和非结核分枝杆菌感染有重要价值，并可用于结核病尤其是肺外结核病的辅助诊断，但该技术操作要求高，试剂盒价格昂贵。3.抗体检测结核分枝杆菌感染后产生多种抗体。用ELISA检测病人血清中特异性抗体，目前已有儿种试剂盒在临床使用，但仍需进一步提高其敏感性和特异性。


医学微生物学 五、防治原则（－）预防接种 1908年，Calmette和Guerin将牛分枝杆菌毒株接种千含胆汁、甘油、马铃薯的培养基中，经230次传代，历时13年，使其毒力发生变异，成为对人无致病性，而仍保持良好免疫原性的疫苗株，称为卡介苗(Bacille Calmette-Guerin, BCG)。卡介苗是目前临床上唯一批准使用的结核病预防用减毒活疫苗；全球现有160多个国家和地区接种卡介苗。我国规定新生儿出生后即接种卡介苗一次。卡介苗主要诱导产生CD4+Thl型免疫应答，而CD8+T细胞反应较弱，保护期10~15年；WHO和我国均不推荐复种。


医学微生物学 五、防治原则（－）预防接种 目前国内外正在研究的新型结核病疫苗多达数十种，包括亚单位疫苗、重组活疫苗、营养缺陷型活疫苗、DNA疫苗等。（二）治疗早期发现活动性肺结核病入，隔离并给予有效药物治疗是控制结核病流行的关键。全球许多国家推广的＂督导短程化疗＂策略(DirectlyObservedTreatmentShort-Course，国内简称为DOTS策略），使结核病的发病率在数十年间首次出现下降。DOTS策略包括五个基本要素，即：政府对结核病规划的承诺；通过痰涂片镜检发现病人；在正确的管理下，给予标准的短程化疗；建立正规的药物供应系统；建立对规划执行的监督、评价系统。DOTS策略不仅是一项医疗措施，还是各种药物治疗与新的现代卫生管理系统相结合。标准化的DOTS治疗策略能够治愈90％以上的病人，其核心为抗结核药物化学治疗。


医学微生物学 五、防治原则（－）预防接种 抗结核一线化疗药物有异烟阱(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)、P比唉酰胺(PZA)、乙胺丁醇(EMB)和氨硫脉(TBl)，二线药物包括对氨基水杨酸钠(PAS)、阿米卡星(AKM)、卷曲霉素(CPM)、环丝氨酸(cs)等。对千潜伏感染者，WHO推荐口服异烟阱，疗程9个月。对于耐药结核病病人，如MDR-TB和XDR-TB病人，需要至少4种有效药物的联合治疗，疗程为培养转阴后至少治疗18个月。一些耐多药肺结核及肺结核的并发症如支气管胸膜搂、结核性支气管扩张等需外科手术切除部分肺组织，以最大可能保留正常肺组织，并降低体内细菌载量。


医学微生物学 第二节麻风分枝杆菌 麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)是麻风病(leprosy)的病原体。麻风病是一种古老的慢性传染病，在世界各地均有流行，主要集中在非洲、亚洲和拉丁美洲。2012年全球新发现麻风病例232857例，主要分布在印度和巴西。1949年至2015年，我国累计登记麻风病病人约51万，治愈近40万例。至2015年，我国尚有麻风病病入3200余例。全国以县（市）为单位，患病率低千万分之一，麻风病已不再是我国重大的公共卫生问题。麻风分枝杆菌主要侵犯皮肤、黏膜和外周神经组织，晚期还可侵入深部组织和脏器，造成严重病损。 （一）瘤型麻风 瘤型麻风为疾病的进行性和严重临床类型，传染性强；如不进行及时有效的治疗，往往发展至最终死亡。细菌主要侵犯皮肤、黏膜，严重时累及神经、眼及内脏，由于机体产生的自身抗体与破损组织抗原形成的免疫复合物沉积在皮肤或黏膜下，形成红斑或结节，称为麻风结节(l eproma)，面部的结节可融合呈“狮面容”，是麻风的典型病征。该型麻风病人的T细胞免疫应答有所缺陷，超敏反应皮肤试验（麻风菌素试验）阴性。病变部位取材病理镜检，可见大量麻风细胞和肉芽肿。


医学微生物学 （二）结核样型麻风 此型麻风常为自限性疾病，较稳定，损害可自行消退。细菌侵犯真皮浅层，病变主要在皮肤，早期病变为小血管周围淋巴细胞浸润，以后出现上皮样细胞和多核巨细胞浸润；也可累及神经，使受累处皮肤丧失感觉。病人体内不易检出麻风分枝杆菌，故传染性小。病人的细胞免疫正常，麻风菌素试验反应阳性。 （三）界线类麻风 兼有瘤型和结核样型麻风的特点，能向两型分化，麻风菌素试验常阴性。病变部位可找到含菌的麻风细胞。 （四）未定类麻风 属麻风病的前期病变，大多数病例可转变为结核样型。麻风菌素试验大多阳性。病灶中很少能找到麻风分枝杆菌。 （二）麻风菌素试验 麻风菌素试验的应用原理与结核菌素试验相同。因麻风分枝杆菌至今不能人工培养，因此麻风菌素常由麻风结节病变组织制备。因为大多数正常人对麻风菌素呈阳性反应，此试验在诊断上意义不大，但可用于评价麻风病人的细胞免疫状态和分型。


医学微生物学 第三节非结核分枝杆菌 非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria, NTM)是除结核分枝杆菌复合群和麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌的统称，又称非典型分枝杆菌(at ypical mycobacteri a)。非结核分枝杆菌广泛存在千水、土壤等自然环境中，故亦称环境分枝杆菌(environmental mycobac teria)，其形态和染色特性酷似结核分枝杆菌，但毒力较弱，生化反应各不相同。目前发现的非结核分枝杆菌种类很多，但大多不致病，属于腐生菌；少数种类的细菌可在肺部有基础疾病的清况下引起人类肺部的结核样病变、组织和脏器慢性感染，小儿淋巴结炎或皮肤创伤后脓肿等，在免疫力低下的人群还可导致播散性感染，属于机会致病菌。1959年Runyon根据培养产生色素情况和生长速度等特点，将非结核分枝杆菌分为4组：心光产色菌(pho tochromogen)：生长缓慢，菌落光滑，在暗处菌落呈奶油色，接触光线1小时后菌落呈橘黄色。其中堪萨斯分枝杆菌(M. kansas)可引起人类肺结核样病变；海分枝杆菌(M. marinum)在水中可通过擦伤的皮肤黏膜引起人的手指、脚趾及鼻黏膜等感染，呈结节及溃疡病变。＠暗产色菌(scotochromogen)：生长缓慢，菌落光滑，在暗处培养时菌落呈橘黄色，长时间曝光培养呈赤橙色。其中擦病分枝杆菌(M. scrofulaceum)可引起儿童的颈部淋巴结炎。＠不产色菌(nonchromogen)：生长缓慢，通常不产生色素。其中对人类有致病性的是鸟分枝杆菌复合体(M. avium complex, MAC)，常引起鸟、家禽等感染，也可引起免疫低下人群感染，是艾滋病病人常见的机会致病菌，偶见千健康人群感染。＠快速生长菌(rapid growers)：生长迅速，25~42t均可生长，分离培养5~7天即可见到粗糙型菌落。其中偶发分枝杆菌(M. Jortuitum)和龟分枝杆菌(M. chelonae)可引起皮肤创伤后脓肿；溃疡分枝杆菌(M. ulcera几s)可引起人类皮肤无痛性坏死溃疡；耻垢分枝杆菌(M. smegmalis)不致病，常存在千阴部，查粪、尿标本中结核分枝杆菌时应加以区别。


医学微生物学 第三节非结核分枝杆菌 我国的结核病流行病学调查资料显示，非结核分枝杆菌菌株的分离阳性率呈上升的趋势，从2000年的11.1％上升至2010年的21%，最常见的是鸟分枝杆菌，其次如偶发分枝杆菌和痹旃分枝杆菌等。许多非结核分枝杆菌对常用的抗结核药物耐药，且菌种不同对抗菌药物的敏感性也有显著差异，应尽可能依据药敏结果和用药史，组合5~6种药物治疗至少两年。最常用的治疗药物是乙胺丁醇和利福霉素类。克拉霉素和阿奇霉素是治疗鸟－胞内分枝杆菌感染的首选药物。 （徐志凯） 嗜血杆菌属(Haenwphilus)是一类革兰阴性小杆菌，常呈多形态性，无鞭毛、无芽胞。该属细菌共有21个种。在人工培养时由于必须提供新鲜血液或血液成分才能生长，故名嗜血杆菌。对人具有致病性的嗜血杆菌主要为流感嗜血杆菌(Haenwphilus influe汜ae, H. influenzae)，可引起呼吸道等部位化脓性感染。


医学微生物学 流感嗜血杆菌 流感嗜血杆菌俗称流感杆菌，是嗜血杆菌属中对人有致病性的最常见细菌。该菌是波兰细菌学家Pfe iffer于1892年流感世界大流行时，首次从流感病人鼻咽部分离获得，当时误认为该菌是流感的病原体，因此得名。直至1933年Smith成功分离出流感病毒，才明确了流感的真正病原体，但流感嗜血杆菌这一名称却仍沿用至今。该菌是流感时继发感染的常见细菌，还可引起小儿急性脑膜炎、鼻咽炎、中耳炎等化脓性疾病。 第一节布鲁菌属 布鲁菌属(Brucella)是一类人畜共患传染病的病原菌，有6个生物种、19个生物型，最早由英国医师David Bruce首先分离出。本属使入致病的有羊布鲁菌(B. melitensis汃牛布鲁菌(B. abortus)、猪布鲁菌(B. suis)和犬布鲁菌(B. canis)，在我国流行的主要是羊布鲁菌病，其次为牛布鲁菌病。


医学微生物学 第二节耶尔森菌属 耶尔森菌属(Yersinia)属于肠杆菌科，是一类革兰阴性小杆菌，现已知13个种和亚种。其中鼠疫耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌小肠结肠炎亚种和假结核耶尔森菌假结核亚种对人类的致病性巳明确。本属细菌通常先引起啃齿动物、家畜和鸟类等动物感染，人类通过接触己感染的动物、食入污染食物或节肢动物叮咬等途径而被感染。 —、鼠疫耶尔森菌 鼠疫耶尔森菌(Y. pestis)俗称鼠疫杆菌，是鼠疫的病原菌。鼠疫是一种自然疫源性的烈性传染病，入类历史上曾发生过三次世界性大流行，每次大流行的菌种在代谢特点方面都有所差别，据此又分别命名为三种生物型，即古典型、中世纪型和东方型。人类鼠疫是被染疫的鼠蛋叮咬而受染或因直接接触、剥食了患有鼠疫的动物（旱獭、绵羊等）。1989-1998年世界各地报告鼠疫病例共5440余例，死亡681人。1994年印度也出现了鼠疫的暴发，死亡率高达10%～30%。鼠疫是我国重点监控的自然疫源性传染病，近数十年我国在防治鼠疫方面已经取得显著成绩，但一些局部地区尚有鼠疫的散在发生。


医学微生物学 能力，与细菌毒力有关。铁因载基凝固酶基因 6变异性鼠疫耶尔森菌通过自发或诱发性突变及基因转移等机制发生变异，其生化特性、毒力、耐药性和抗原构造等均可出现变异菌株。与多数肠道菌光滑(S)型菌落致病性强的特征不同，野生菌株的菌落呈粗糙(R)型，毒力强。经人工传代培养后菌落逐渐转变为S型，其毒力也随之减弱。 二、小肠结肠炎耶尔森菌小肠结肠炎亚种 小肠结肠炎耶尔森菌小肠结肠炎亚种(Y. enterocolitica subsp. enterocolitica)是引起人类严重的小肠结肠炎病原菌。本菌天然定植在多种动物体内，如鼠、兔、猪等，通过污染食物（牛奶、肉类等）和水，经粪口途径感染或因接触染疫动物而感染。近年来本菌中某些血清型引起的肠道感染正逐渐上升，受到世界各国的普遍重视。


医学微生物学 二、小肠结肠炎耶尔森菌小肠结肠炎亚种 革兰阴性球杆菌，偶见两端浓染。无芽胞、无荚膜，25°C培养时有周身鞭毛，但37°C培养时则很少或无鞭毛。营养要求不高，兼性厌氧。耐低温，在4°C能生长，但最适温度为20~28°C，最适pH7.6。在普通琼脂培养基上生长良好。在肠道菌选择培养基上培养可形成无色半透明、扁平的小菌落。根据菌体0抗原可将本菌分为50多种血清型，但仅几种血清型与致病有关，且致病型别各地区也不同。我国主要为09、08、05和03等。此外有毒力菌株大都具有V和W抗原、外毒素蛋白等。本菌为一种肠道致病菌，具有侵袭性及产毒素性。V-W抗原具有抗吞噬作用。03、08、09等菌株产生耐热性肠毒素，与大肠埃希菌肠毒素ST相似。另外，某些菌株的0抗原与人体组织有共同抗原，可刺激机体产生自身抗体，引起自身免疫性疾病。


医学微生物学 二、小肠结肠炎耶尔森菌小肠结肠炎亚种 人类通过食用该菌污染的食物和水而受染，潜伏期3~7天，以小肠、结肠炎为多见，临床表现以发热，腹痛和腹泻（水样便或血样便）为主，病程3~4天，常呈自限性。而有些病人可发展为自身免疫并发症的肠道外感染，如关节炎、结节性红斑等。败血症非常少见，多见于糖尿病、艾滋病或肿瘤病等病人。本菌引起的肠道感染常呈自限性，不需要做特殊治疗。但对千肠道外感染包括败血症病人的治疗，临床上常采用广谱的头抱菌素与氨基贰类联用，取得较好的疗效。 三、假结核耶尔森菌假结核亚种 假结核耶尔森菌假结核亚种(Y. pseudotuberculosis subsp pseudotuberc ulosis)存在于多种动物的肠道中，人类感染较少，主要通过食用患病动物污染的食物而感染。由千该菌在动物感染的脏器中形成粟粒状结核结节，在人的感染部位形成结核样肉芽肿，故称假结核耶尔森菌。本菌为革兰阴性，无荚膜、无芽胞。本菌的生化反应与鼠疫耶尔森菌相似，根据菌体O抗原将细菌分为6个血清型，引起人类感染的主要是01血清型。


医学微生物学 三、假结核耶尔森菌假结核亚种 假结核耶尔森菌对豚鼠、家兔、鼠类等有很强的致病性，患病动物的肝、脾、肺和淋巴结等可形成多发性粟粒状结核结节。人类感染多为胃肠炎，肠系膜淋巴结肉芽肿，回肠末端炎等，后者的症状与阑尾炎相似，多发生于5~15岁的学龄儿童，易发展为败血症。少数表现为高热、紫瘢，并伴有肝脾大类似肠伤寒的症状。也可发生呈结节性红斑等自身免疫病。临床取粪便、血液等标本进行微生物学检查。多采用肠道选择性鉴别培养基进行分离培养，根据生化反应及动力等，作出初步判断，最后用血清学试验进行鉴定。治疗本菌感染可采用广谱抗生素。 第三节芽胞杆菌属 芽胞杆菌属(Bacillus)是一群需氧，能形成芽胞的革兰阳性的大杆菌。其中炭疽芽胞杆菌是引起动物和人类炭疽病的病原菌，蜡状芽胞杆菌可产生肠毒素引起人食物中毒。其他大多为腐生菌，主要以芽胞形式存在于土壤、水和尘埃中，一般不致病，当机体免疫力低下时，如枯草芽胞杆菌等偶尔可引起结膜炎、虹膜炎及全眼炎等。此外，因芽胞对外环境抵抗力强，这些腐生菌也是实验室及制剂生产车间的常见污染菌。


医学微生物学 —、炭疽芽胞杆菌 炭疽芽胞杆菌(B. anthracis)引起炭疽病(anthrax)，是芽胞杆菌属中主要的致病菌，也是人类历史上第一个被发现的病原菌。牛羊等食草动物的发病率最高，人可通过摄食或接触患炭疽病的动物及畜产品而感染。 第十五章动物源性细菌 抗吞噬作用，与细菌毒力有关。(3)芽胞抗原：由芽胞的外膜、皮质等组成的芽胞特异性抗原，具有免疫原性和血清学诊断价值。(4)菌体多糖抗原：由D-葡萄糖胺、D-半乳糖组成，与毒力无关。由千耐热，此抗原在病畜皮毛或腐败脏器中经长时间煮沸仍可与相应抗体发生沉淀反应，称Ascol i热沉淀反应，有利千对炭疽芽胞杆菌病原的流行病学调查。4.抵抗力细菌芽胞在干燥土壤或皮毛中能存活数年至20余年，牧场—旦被污染，传染性可持续数十年。芽胞对化学消毒剂的抵抗力也很强，如用5％苯酚需5天才被杀死。但对殡及氧化剂较敏感，1:2500懊液10分钟、0.5％过氧乙酸10分钟即可杀死。高压蒸汽灭菌法121°C、15分钟能杀灭芽胞。本菌对青霉素、红霉素、氯霉素等均敏感。


医学微生物学 二、蜡状芽胞杆菌 蜡状芽胞杆菌(B. cereus)为革兰阳性大杆菌，芽胞多位于菌体中央或次极端。在普通琼脂平板上生长良好，菌落较大，灰白色，表面粗糙似融蜡状，故名。本菌广泛分布千土壤、水、尘埃、淀粉制品、乳和乳制品等食品中，是仅次于炭疽芽胞杆菌的人类和动物的致病菌，可引起食源性疾病和机会性感染。蜡状芽胞杆菌引起的食物中毒可分两种类型：心呕吐型：由耐热的肠毒素引起，于进食后出现恶心、呕吐症状，严重者偶可出现暴发性肝衰竭；＠腹泻型：由不耐热肠毒素引起，进食后发生胃肠炎症状，主要为腹痛、腹泻和里急后重，偶有呕吐和发热。此外，该菌有时也是外伤后眼部感染的常见病原菌，引起全眼球炎，治疗不及时易造成失明。在免疫功能低下或应用免疫抑制药的病人中还可引起心内膜炎、菌血症和脑膜炎等。本菌对红霉素、氯霉素和庆大霉素敏感，对青霸素、磺胺类耐药。


医学微生物学 第四节柯克斯体属 柯克斯体属(Coxiella)归属千柯克斯体科，其下只有一个种，即贝纳柯克斯体(C. bumetii)，亦称Q热柯克斯体，是Q热(q u ery fever)的病原体。Q热，为疑问热，指原因不明的发热，Burn e t等于1937年证明其病原体是一种立克次体，并命名为贝纳柯克斯体，以前将其归类于立克次体目的立克次体科，现归类于军团菌目中的柯克斯体科。 贝纳柯克斯体感染后还可引起肉芽肿性肝炎。 病后可获得一定的免疫力，以细胞免疫为主，体液免疫也有一定的作用。 第五节巴通体属 巴通体属(Bartonella)归属千巴通体科，其中汉塞巴通体(B. henselae)为猫抓病(cat scratch邮ease,CSD)的主要病原体；五日热巴通体(B. quintana)为五日热的主要病原体。


医学微生物学 —、汉塞巴通体 汉塞巴通体形态多样，主要为杆状，大小为lµmx O.5µm左右。革兰染色阴性，Giemsa染色呈紫蓝色，锁银染色呈棕黄色。从新鲜标本分离出来的有菌毛，经传代后可丧失。可在非细胞培养基中生长繁殖。近年来由于饲养宠物猫、狗人群日益增多，猫抓病发病率也逐年增高。传染源主要是猫和狗，尤其是幼猫，其口腔和咽部的病原体污染自身皮毛和爪，通过咬、抓或接触传播给人。病人大多有被猫或狗咬伤抓伤或接触史，90％的病人是儿童或青少年。病原体从伤口进入，潜伏期约14天左右，局rt{t}部皮肤出现脓疤，淋巴结肿大，发热、厌食、肌痛和脾大等临床综合征，常合并结膜炎伴耳前淋巴结肿大，称为帕里诺(Parinaud)眼淋巴结综合征，为“猫抓病”的重要特征之一。汉赛巴通体还可引起免疫功能低下的病人患杆菌性血管瘤－杆菌性紫瘢(b ac ill ary angiomatosisbacillary peliosis, BAP)，其主要表现为皮肤损害和内脏小血管壁增生。杆菌性血管瘤可发生在任何内脏组织；而杆菌性紫瘢则多发生在肝和脾。


医学微生物学 —、汉塞巴通体 预防目前尚无疫苗。对宠物定期检疫，杀灭感染宠物。被宠物咬伤或抓伤后局部用碳酒消毒。临床治疗应用环丙沙星、红霉素和利福平等。 二、五日热巴通体 五日热巴通体原称为五日热罗卡利马体，可在细胞外生长，在体乱肠腔中繁殖，是五日热（又名战壕热）的病原体。五日热是经乱传播的急性传染病，人为唯一传染源，春冬季发病较多。主要临床表现为周期性发热、严重肌肉疼痛。胫骨痛、眼球痛、复发倾向及持久的菌血症。少数病人可出现心内膜炎、BAP等。无症状菌血症可持续数月，甚至1~2年或更长。实验室确诊有赖于血清免疫学如补结试验等，也可采用人工感染乱子法，以病人血液喂乱，在乱肠道中进行病原体检查，但需与伤寒、流行性斑疹伤寒、回归热等鉴别。治疗可用四环素或氯霉素，疗程宜较长(8~l0日），预后一般良好。


医学微生物学 第六节弗朗西斯菌属 弗朗西斯菌属(Fr ancise ll a)是一类呈多形性的革兰阴性小杆菌，有腰楼弗朗西斯菌(Fran cisella. p hi lo miragia)和土拉弗朗西斯菌(F. tularesis)2个种，前者过去称腰楼耶氏菌(Y. philomiragia),发现千水环境，仅对免疫抑制病人致病。土拉弗朗西斯菌(F. tulares is)包括4个亚种，其中土拉弗朗西斯菌土拉亚种为土拉热的病原体。本菌引起一些野生动物的感染，特别常见于野兔中，故俗称野兔热杆菌，人类常因接触野生动物或病畜引起土拉热。该菌为球杆状小杆菌，大小为(0.2-0.3)µm x(0.3-0.7)µm，无芽胞、无动力，在动物组织内有荚膜。专性需氧，营养要求高，普通培养基上不易生长，常用卵黄培养基或胱氨酸血琼脂培养基，孵育24~48小时形成灰白色细小、光滑，略带黏性的菌落。对热敏感，56°C5~10分钟即死亡。但对低温有很强的耐受力，在4°C水中或湿土中可存活4个月，在0°C以下可存活9个月。对一般化学消毒剂敏感。


医学微生物学 第六节弗朗西斯菌属 野兔、鼠类等多种野生动物和家畜都可被土拉弗兰西丝杆菌感染。动物之间主要通过婢、蚊、蛋、乱等吸血节肢动物叮咬传播，人类也易感，可通过多种途径感染，如直接接触患病的动物或被动物咬伤、节肢动物叮咬、食入污染食物，亦可经空气传播引起呼吸道感染。其致病物质主要是荚膜和内毒素。细菌侵袭力强，能穿过完整的皮肤和黏膜。另外，菌体多糖抗原可引起速发型超敏反应，蛋白质抗原可引起迟发型超敏反应等也参与致病。人感染后潜伏期一般为2~10天，发病较急，临床表现为发热、剧烈头疼、关节痛等，重者出现衰竭与休克。由于感染途径不同，临床类型可多样化，有溃疡腺型胃肠炎型、肺炎型和伤寒样型等。病后2~3周出现IgM和IgG抗体，可持续存在多年，但无保护作用。病原学检查采取病人血液、组织穿刺液或活检组织。标本革兰染色镜检的价值不大，血清学试验是土拉热诊断最常用的方法，在病程中血管凝集效价呈4倍或以上增长或单份血清效价达I:160有诊断意义。预防可用减毒活疫苗经皮上划痕接种。治疗选用链霉素或庆大霉素效果较好，也可用四环素类。


医学微生物学 第十五章动物源性细菌155第七节巴斯德菌属 巴斯德菌属(Pasteurella)为革兰阴性、球杆状的细菌，常寄生千哺乳动物和鸟类上呼吸道和肠道黏膜上。对人类致病的主要是多杀巴氏菌(P. multocida)，为革兰阴性球杆菌，常呈两极浓染，无鞭毛，无芽胞有荚膜。营养要求较高，需在含血的培养基上生长，在血平板上形成白色、不溶血的半透明小菌落。本菌属为动物源性细菌，致病物质为荚膜与内毒素。可引起低等动物的败血症和鸡霍乱。人可通过接触染病的动物而感染，所致疾病有伤口感染、脓肿、肺部感染、脑膜炎、腹膜炎、关节炎等。实验室检查应采取病人血、痰、脑脊液或脓等直接涂片染色镜检，并接种血平板作分离培养。根据菌落特征和形态染色的结果，再做生化反应和血清学试验进行鉴定。治疗上可选择青霉素G，四环素类或嗤诺酮类等抗生素。


医学微生物学 第一节棒状杆菌属 棒状杆菌属(Coryne b acterium)的细菌因其菌体一端或两端膨大呈棒状而得名。革兰染色阳性，菌体着色不均匀，出现浓染颗粒或有异染颗粒。排列不规则，呈栅栏状。无荚膜、无鞭毛，不产生芽胞。本属细菌有103个种和亚种，与人类有关的如白喉棒状杆菌、假白喉棒状杆菌2培养特性衙氧或兼性厌氧。在含全血或血清培养基上置35~37"C时细菌生长良好；在含有凝固血清的吕氏培养基(Loeffler medium)上生长迅图16-1臼喉棒状杆菌异染颗粒(Albe rt染色）速，经12-18小时培养即可形成圆形灰白色的小菌落，菌体形态典型，异染颗粒明显。在含有0.03%-0.04％亚啼酸钾(K2Te02·3H20)血琼脂平板上生长时，能使亚啼酸钾还原为黑色的金属元素啼，故菌落呈黑色或灰色，亚啼酸钾还有抑制其他杂菌生长的作用。根据该菌在亚啼酸钾血琼脂平板上形成的三种不同形态特征菌落，分别被称为重型、轻型和中间型。重型：菌落大，呈灰色，表面光滑，无光泽，边缘不规则且有条纹，不溶血；轻型：菌落小，呈黑色表面光滑有色泽边缘整齐，溶血；中间型：菌落小，呈灰黑色表面较光滑边缘较整齐，不溶血。三型的产毒株与疾病的轻重程度无明显的对应关系，但对流行病学分析有一定意义，在我国以轻型产毒株多见。


医学微生物学 第一节棒状杆菌属 3变异白喉棒状杆菌形态、菌落和毒力均可发生变异。当无毒株白喉棒状杆菌携带仕棒状杆菌噬菌体成为溶原性细菌时，便可成为产生白喉毒素的产毒株并能随细胞分裂遗传下去。4抵抗力白喉棒状杆菌对湿热较敏感，100°C1分钟或58°C10分钟即可被杀死。对一般消毒剂敏感，如5％苯酚溶液1分钟，3％甲酚皂溶液10分钟处理可杀灭。但对日光、寒冷和干燥抵抗力较强，在衣物、儿童玩具等多种物品中可存活数日至数周。对青霉素及红霉素敏感；对磺胺类、卡那霉素和庆大霉素不敏感。 三、微生物学检查法包括细菌学检查和细菌毒力测定两部分。 1.标本采集用无菌拭子直接从病人鼻腔、咽喉等病变部位假膜处及其边缘取材。2直接涂片镜检将鼻咽拭子标本直接涂片，进行亚甲蓝、革兰或Albert染色后镜检。如有白喉棒状杆菌的典型形态、排列和异染颗粒，结合临床症状可作初步诊断。白喉治疗是否及时与死亡率密切相关，故早期快速诊断至关重要。


医学微生物学 三、微生物学检查法包括细菌学检查和细菌毒力测定两部分。 3.分离培养将标本接种于吕氏血清斜面上，培养6~12小时后，取培养物作涂片镜检，检出率比直接涂片高，有助于快速诊断。延长培养至18小时即可见灰白色小菌落，可进一步作生化反应和毒力试验鉴定。也可将标本分别接种于血琼脂和亚啼酸钾血琼脂平板，37°C培养24~48小时，根据菌落特点进行鉴定。 4毒力试验是鉴别产毒白喉棒状杆菌与其他棒状杆菌的重要方法。 (1)体内法：通过豚鼠体内中和试验测定毒力。将待检菌的培养物(2mV只）注射实验组豚鼠皮下；对照组豚鼠则于12小时前腹腔内注射白喉抗毒素5OOU后，再千皮下注射待检菌培养物(2mV只）。若千2~4天实验组动物死亡而对照组动物存活，表明待检菌能产生白喉毒素。(2)体外法：常用琼脂Elek平板毒力试验。在蛋白脉肉汤或牛肉消化液的琼脂平板上，平行接种待检菌和阳性对照产毒菌，然后垂直铺一条浸有白喉抗毒素(IOOOU/ntl)的滤纸片。37°C孵育24~48小时，若待检菌产生白喉毒素，则在纸条与菌苔交界处出现有白色沉淀线。无毒菌株则不产生沉淀线。此外，尚可用对流免疫电泳或SPA协同凝集试验检测待检菌培养物上清液中的毒素。


医学微生物学 第二节鲍特菌属 鲍特菌属(Bordetella)的细菌是一类革兰阴性球杆菌，有8个菌种。其中百日咳鲍特菌(B. pertussis)、副百日咳鲍特菌(B. parape rtus泌）和支气管败血鲍特菌(B. branch虚ptica)都是引起哺乳动物呼吸道感染的病原菌，但宿主范围各不相同。百日咳鲍特菌俗称百日咳杆菌，是人类百日咳的病原体。副百日咳鲍特菌可引起急性呼吸道感染，支气管败血鲍特菌主要感染动物，偶可感染人类。本节主要介绍百日咳鲍特菌。 治疗首选红霉素、罗红霉素等。第三节军团菌属 军团菌属(legionella)的细菌是一类革兰阴性杅菌，广泛分布千自然界，尤其适宜温暖潮湿地带的天然水源及人工冷、热水管道系统中。本属细菌现已有50多个种，已从人体分离出的有嗜肺军团菌米克戴德军团菌、伯兹曼军团菌等20个菌种。对人致病的主要为嗜肺军团菌(L. pneurrwphil a)，引起人类军团病(Legionnaires disease)，本节作主要介绍。


医学微生物学 治疗首选红霉素、罗红霉素等。第三节军团菌属 军团病的名称来源于1976年7月在美国费城召开的一次退伍军人大会期间，突然暴发流行一种原因不明的肺炎，当时称为军团病。后从死亡者肺组织中分离出一种新的革兰阴性杆菌，命名为军团,菌。1984年，该菌被正式命名为军团菌属。此后在世界许多国家均有军团病的发生。我国1982年首次报道该菌感染，至今已有十余起暴发流行发生。该菌还能引起一种叫做庞蒂亚克热(Pontiac fever)的疾病，即临床表现为轻型的军团病。 第四节假单胞菌属 假单胞菌属(Pseudomonas)是一群革兰阴性小杆菌，广泛分布千土壤、水和空气中。有荚膜、鞭毛和菌毛，无芽胞，需氧。在所有的培养基上均生长良好。其种类繁多，目前发现的菌种已超过150个，与人类关系密切的主要有铜绿假单胞菌(P. aeruginosa)、荧光假单胞菌(P. fluorescens)和类鼻疽假单胞菌(P. pseudomallei)等。主要引起机会性感染，如输入了被荧光假单胞菌污染的血液或血制品后，可出现败血症或不可逆的休克。类鼻疽假单胞菌在东南亚地区可引起地方性人和动物的类鼻疽病。


医学微生物学 第四节假单胞菌属 本节重点介绍铜绿假单胞菌。铜绿假单胞菌俗称绿脓杆菌，广泛分布于自然界及人和动物体表及肠道中，是一种常见的机会致病菌。由于在生长过程中产生绿色水溶性色素，感染后的脓汁或敷料上出现绿色，故得名。 三、微生物学检查法与防治 可用粪便标本涂片、镜检，查找革兰阴性弧形或海鸥状弯曲菌，或用悬滴法观察鱼群样运动或螺旋式运动。分离培养可直接选用含多黏菌素B和万古霉素的选择性培养基，千42°C和37°C微需氧环境下培养48~72小时。PCR法可直接检出粪便中的弯曲菌特异性DNA。目前尚无特异性疫苗。预防主要是注意饮水和食品卫生，加强人、畜、禽类的粪便管理。本菌感染轻症病人一般不需要治疗，如需治疗可用红霉素、氨基糖昔类抗生素、嗤诺酮类等。


医学微生物学 第五节弯曲菌属 弯曲菌属(Campylobacter)是一类呈逗点状或S形的革兰阴性细菌，有26个种。广泛分布千动物界，常定居于家禽和野鸟的肠道内。主要引起人类的胃肠炎和败血症，也可引起肠道外感染，为动物源性疾病。对人致病的有空肠弯曲菌空肠亚种(C. jejuni subsp. jejuni)、大肠弯曲菌(C. coli)和胎儿弯曲菌(C. sputomm)等13个种，其中以空肠弯曲菌空肠亚种最为常见。


医学微生物学 第六节不动杆菌属 不动杆菌属(Acinetobacter)有至少33个菌种，是一群专性需氧、不发酵糖类的革兰阴性菌，呈球形或球杆状，有荚膜，无芽胞，无鞭毛。广泛分布于土壤和水中，易在潮湿环境中生存，如浴盆、肥皂盒等处，也存在千健康人的皮肤、咽、结膜、唾液、胃肠道及阴道分泌物中，是机会致病菌。其中鲍曼不动杆菌(A. baumannii)较多见，也是导致医院内感染的常见菌之一。醋酸钙不动杆菌(A. calcoaceticus)、洛菲不动杆菌(A. lwoffii)、溶血不动杆菌（A. haemolytius汃琼氏不动杆菌(A.junii)和约翰逊不动杆菌(A. jo hnsonii)及其他不动杆菌也偶尔可分离出。来自于病人标本的细菌在各种培养基上均生长良好。该类细菌黏附力极强，易黏附在各类医用材料上，成为贮菌源。


医学微生物学 第六节不动杆菌属 感染源可以是病入自身（内源性感染），亦可以是不动杆菌感染者或带菌者，尤其是双手带菌的医务人员。传播途径有接触传播和空气传播。在医院内，污染的医疗器械及医护人员的手是重要的传播媒介。易感者为老年病人、早产儿和新生儿，手术创伤、严重烧伤、气管切开或插管、使用人工呼吸机、行静脉导管和腹膜透析者及广谱抗菌药物或免疫抑制剂应用者也易感染。该菌带多种耐药基因，可将其耐药性传递给其他细菌，而且还能接受其他细菌的耐药基因，故可对多种抗生素耐药。在经验用药阶段，往往首选头抱眽酮－舒巴坦、亚胺培南－西司他丁，替甲环素、米诺环素。然后，则根据药敏结果调整选用方案。目前推荐对多重耐药不动杆菌，可经验选用含有舒巴坦复合制剂的联合抗感染方案。 第七节窄食单胞菌属 窄食单胞菌属(Stenotrophomonas)有6个菌种，而嗜麦芽窄食单胞菌是最先发现的一个菌种，也是该菌属中主要致人类疾病的细菌。


医学微生物学 第七节窄食单胞菌属 嗜麦芽窄食单胞菌(S. maltophilia)是一种专性需氧的非发酵型革兰阴性杆菌，有丛鞭毛，无芽胞，无荚膜，菌落呈针尖状，直径0.5~I mm，中央凸起。在血平板上有刺鼻的氨味，呈B溶血；在营养琼脂培养基上显示灰黄色素或无色素，该菌生化反应不活跃，营养谱有限，对葡萄糖只能缓慢利用，但能快速分解麦芽糖而迅速产酸，故得名。还原硝酸盐为亚硝酸盐，氧化酶阴性，DNA酶阳性，水解明胶和七叶甘，赖氨酸脱狻酶阳性。该菌广泛存在千土壤、植物、人和动物的体表、消化道及医院环境中，随着广谱抗菌药物和免疫抑制剂的广泛应用以及介入性医疗操作的不断增多，该菌的分离率呈逐年上升趋势，而在医院环境和医务人员皮肤上的该菌分离率更高。其临床分离率仅次千铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌，居非发酵菌第3位，是人类重要的机会致病菌和医院感染菌。该菌还对山羊、鍔鱼、绘鱼、猪等动物以及水稻等植物致病，因此，该菌是人、畜、水产动物和水稻等植物共同的病原菌。


医学微生物学 第七节窄食单胞菌属 嗜麦芽窄食单胞菌的致病机制还不完全清楚，可能与其产生的弹性蛋白酶、脂酶、黏多糖酶、透明质酸酶、DNA酶和溶血素等有关。感染后可引起肺炎、菌血症、败血症、心内膜炎、脑膜炎、腹膜炎、伤口感染、眼部感染、纵隔炎、牙周炎和骨骼、关节、泌尿道、消化道及软组织等感染，以下呼吸道感染最为常见，其死亡率高达43％以上。引起如此高的死亡率的主要原因首先是由于该菌具有多重耐药性，导致其对目前大多数的抗菌药物不敏感；其次是该菌对一些最初敏感的抗菌药物在治疗过程中很快产生耐药，从而导致治疗失败，引起死亡。该菌感染的大部分病人有发热、寒战、腹胀、乏力和淡谟等临床表现，同时伴有中性粒细胞数量的减少，病情危重并发症可出现休克、弥散性血管内凝血、多器官衰竭综合征等。人类嗜麦芽窄食单胞菌感染的易感因素有机体自身和医源性两类，自身因素包括年龄，老年人是高危易感者；基础性疾病，如肿瘤、慢性呼吸道疾病、糖尿病、尿毒症和艾滋病等。医源性因素包括抗菌药物用药史、介入性医疗操作（如各种插管、人工瓣膜和引流管等）、化疗、放射治疗和未严格执行消毒措施等。该菌对亚胺培南（泰能）天然耐药，临床治疗首选复方磺胺甲嗯嗤／甲氧茉唗。


医学微生物学 第八节莫拉菌属 莫拉菌属(Moraxella)与不动杆菌属同属莫拉菌科，共有15个种。为革兰染色阴性的小杆菌、球杆菌或球菌，无鞭毛，不发酵，时1啋试验阴性。氧化酶阳性，触酶阳性。属机会致病菌。感染多发生于肿瘤及化、放疗等免疫功能低下的病人。莫拉菌属中的大多数细菌对抗微生物药物敏感。卡他莫拉菌(M. cala rrh alis)在痰液中常呈肾形双球菌状排列，存在于吞噬细胞内或外，一般不致病，是上呼吸道正常菌群成员。当机体免疫力低下时，可单独或与其他细菌共同引起黏膜卡他性炎症、急性咽喉炎、支气管炎、肺炎、急性中耳炎或脑膜炎等，是引起上呼吸道感染的第3位常见病原菌，仅次千流感嗜血杅菌和肺炎链球菌。其致病物质主要是内毒素。大多数菌株对青霉素、四环素、l座诺酮和氨基糖贰类敏感，但该菌的B－内酰胺酶产生率高达90％以上，故临床治疗这类感染时，应根据药物敏感试验结果选用抗生素。


医学微生物学 第九节气单胞菌属 气单胞菌属(Aeromonas)有30个菌种，是一类具有单端鞭毛、有荚膜的革兰阴性短杆菌，两端钝圆，无芽胞。能利用D葡萄糖作为唯一或主要碳源和能量来源。其中嗜水气单胞菌嗜水亚种(A. hydrophila subsp. hydrophila)和豚鼠气单胞菌(A. caviac)为主要致病的菌种。可引起人类胃肠炎、食物中毒、败血症及创伤感染等。嗜水气单胞菌为水中常居菌，普遍存在千淡水、污水、淤泥、土壤、食品和粪便中。主要传染源为带菌动物和病人，冷血动物（如鱼等）为本菌的重要自然宿主，为引起人类感染的主要来源，是一种典型的人畜共患病原菌。进食由细菌污染的水和食物等而发生肠内感染，多见千5岁以下儿童和中年成人；也可引起肠外感染，如败血症、伤口感染、脑膜炎、骨髓炎等。能致肠内感染导致腹泻的气单胞菌可产生肠毒素。肠毒素分为细胞溶解性、细胞毒性和细胞兴奋性三种，前两种能溶解兔红细胞，后者可用中国地鼠卵巢(C H O)细胞毒性试验检出，受毒素作用的CHO细胞由圆变长。用霍乱毒素(CT)的基因探针验证，细胞溶解性和细胞兴奋性肠毒素的基因都与CT有同源性。


医学微生物学 第九节气单胞菌属 根据不同疾病分别采取粪便或肛拭、血液、脓汁、脑脊液和尿液等标本进行微生物学检查。用血平板和选择性培养基同时进行分离培养，本菌属在血琼脂平板上35°C培养18~24小时，呈灰臼色或淡灰色菌落，多数有狭窄溶血环；在麦康凯平板上呈无色、半透明菌落。对分离菌落作氧化酶、时1啋试验等进行鉴定，并注意与弧菌属和邻单胞菌的鉴别，必要时用分子生物学技术对气单胞菌的基因进行鉴定。治疗可用氨基糖昔类抗生素、氯霉素和哇诺酮类抗菌药物。 第十节李斯特菌属 李斯特菌属(Liste r ia)有10个菌种，为一类革兰阳性无芽胞的兼性厌氧杆菌，对外界环境耐受性较强，可在较高的盐浓度(10%NaC l)、较宽的pH(pH4.5~9.0)和温度范围(3~45屯）内生长。其中仅产单核细胞李斯特菌(L. TTW叩cytogenes)对人类致病，引起李斯特菌病，主要表现为脑膜炎和败血症等。曾有食用由李斯特菌污染的熟肉制品等食物而致肠道感染的报告。


医学微生物学 第十节李斯特菌属 产单核细胞李斯特菌的形态为球杆状，常成双排列。有鞭毛，无芽胞，可产生荚膜。营养要求不高，在血平板上培养有狭窄B溶血环。在室温中动力活泼，但在37°C时动力缓慢，此特征可作为初步判定。能发酵多种糖类，与多种革兰阳性菌有共同抗原，故血清学诊断无意义。产单核细胞李斯特菌广泛分布千自然界，在健康人群中的携带率为1%～5%。在人群中致病多见于新生儿、高龄孕妇和免疫功能低下者。其致病物质为李斯特菌溶素0(listeriolysin0)，与链球菌溶素0和肺炎链球菌溶素(pneumol ysin)的基因具有同源性。此溶素需细菌被吞噬后在细胞内生长时释放，这与细菌能在巨噬细胞和上皮细胞内生长以及在细胞间的传播有关。属胞内寄生菌。本菌所致新生儿疾患有早发和晚发两型。早发型为宫内感染，常致胎儿败血症，病死率极高。晚发型在出生后2~3天引起脑膜炎、脑膜脑炎和败血症等。本菌致成人感染主要是引起脑膜炎和败血症等。


医学微生物学 第十节李斯特菌属 微生物学检查可取血液、脑脊液进行检查，也可采集宫颈、阴道、鼻咽部分泌物，新生儿肪带残端、羊水等，引起肠道感染者可取可疑食物、粪便和血液等。根据细菌形态学、培养特性及生化反应作出诊断。本菌容易被认为是污染的杂菌而丢弃，幼龄培养呈革兰阳性，48小时后多转为革兰阴性。因此当遇到25't:培养有动力的杆菌，而按照革兰阴性杅菌鉴定不符时，应考虑到李斯特菌的可能。治疗可用青霉素、氨苇西林、庆大霉素或红霉素等。 （黄升海） 放线菌(Actinomycetes)是一类丝状或链状、呈分枝生长的原核细胞型微生物。1877年，Harz在牛颗肿病病灶中分离得到该病原菌，因其菌丝呈放射状排列，故名放线菌。放线菌具有菌丝和抱子，在固体培养基上生长状态与真菌相似，19世纪以前把放线菌归类为真菌。随着科学技术的发展和应用，近代生物学手段的研究结果表明，放线菌的结构和化学组成与细菌相同，属于一类具有分枝状菌丝体的细菌。迄今，系统学家们综合各种放线菌的研究证据，在《伯杰系统细菌学手册》(2004年）中将放线菌提升为放线菌门，属千原核生物界细菌域第14门。


医学微生物学 （黄升海） 放线菌广泛分布于自然界，主要以抱子或菌丝状态存在于土壤、空气和水中。放线菌种类繁多，有53个属，数于个种。常见的有链霉菌属(Streptomyces)、放线菌属(Actinomyces)、诺卡菌属(Nocardia)、小抱子菌属(MicroTTWnospora)、游动放线菌属(Actinoplanes)和马杜拉放线菌属(Act inoma.dura)等。致病性放线菌主要为放线菌属和诺卡菌属中的菌群。放线菌属为人体的正常菌群，可引起内源性感染，诺卡菌属为腐物寄生菌，广泛存在于土壤中，引起外源性感染。放线菌属与诺卡菌属主要特征的比较见表17-1。此外，放线菌的代谢产物具有重要的生物学功能，与人类的生产和生活密切相关。目前广泛使用的抗生素约70％由各种放线菌产生，如链霉素、卡那霉素、创新霉素、绛红霉素、利福霉素等分别来自链霉菌属、游动放线菌属和诺卡菌属。某些放线菌还能产生各种酶制剂、维生素和氨基酸等物质。


医学微生物学 特征放线菌属诺卡菌属 分布寄生在人和动物口腔、上呼吸道、胃肠道、泌尿存在于土壤等自然环境中，多为腐生菌培养特性厌氧或微需氧专性需氧35~37"C生长，20-25"C不生长37"C或20~25"C均生长感染性内源性感染外源性感染代表菌种衣氏放线菌、牛型放线菌星形诺卡菌、巴西诺卡菌放线菌属(Actinomyces)有35个种，在自然界广泛分布，正常寄居在入和动物口腔、上呼吸道、胃肠道和泌尿生殖道，常见的有衣氏放线菌(A. israelii)、牛型放线菌(A. bovis)、内氏放线菌(A. naeslundii)黏液放线菌(A. uiscous)和龋齿放线菌(A. odontolyticus)等。其中对人致病性较强的为衣氏放线菌。（一）生物学性状本属放线菌为革兰阳性、无芽胞、无荚膜、无鞭毛的非抗酸性丝状菌，菌丝直径0.5-0.8µ,m。以裂殖方式繁殖，常形成分枝状无隔菌丝，有时菌丝能断裂成链球或链杆状，形态与类白喉杆菌相似。


医学微生物学 特征放线菌属诺卡菌属 放线菌属培养比较困难，生长缓慢，厌氧或微需氧，初次分离加5%CO2可促进其生长。最适培养温度37'(:，在葡萄糖肉汤培养基中培养3~6天，可见培养基底部形成灰臼色球形小颗粒沉淀物。在血琼脂平板上培养4~6天可长出灰白色或淡黄色、租糙、微小圆形菌落，不溶血，显微镜下观察可见菌落由长度不等的蛛网状菌丝构成。在脑心浸液琼脂培养基上培养4~6天可形成白色、表面粗糙的大菌落，称为“白齿状＂菌落。在病人病灶组织和搂管流出的脓汁中，可找到肉眼可见的黄色小颗粒，称硫黄样颗粒(su lfur granule)，这种颗粒是放线菌在组织中形成的菌落。将硫黄样颗粒制成压片或组织切片，在显微镜下可见放射状排列的菌丝，菌丝末端膨大呈棒状，形似菊花状（图17-1)。放线菌属能发酵葡萄糖，产酸不产气，过氧化氢酶试验阴性。衣氏放线菌能还原硝酸盐、分解木糖，不水解淀粉，而牛型放线菌则不能还原硝酸盐，不分解木糖，但能水解淀粉。 （三）微生物学检查


医学微生物学 （三）微生物学检查 1病原学检查最适标本是硬下疽渗出液，其次是梅毒疹渗出液或局部淋巴结抽出液，可用暗视野显微镜观察梅毒螺旋体，也可用直接免疫荧光或ELISA法检查。组织切片标本可用锁银染色法染色后镜检。2血清学试验有非梅毒螺旋体抗原试验和梅毒螺旋体抗原试验两类。(I)非梅毒螺旋体抗原试验：用正常牛心肌心脂质(cai-diolipin)作为抗原，测定病人血清中的反应素（抗脂质抗体）。国内较常用RPR(ra pid plasma reagin)和TRUST(tolulized red unheated serum t es t)试验，前者以碳颗粒作为载体，结果呈黑色，后者以甲苯胺红为载体，结果呈红色，均用于梅毒初筛。VDRL(vemereal diseas e r e如ence laborato1-y)试验是诊断神经性梅毒唯一可靠的血清学方法，也可用于梅毒初筛，但国内使用极少。因上述试验中均采用非特异性抗原，故一些非梅毒疾病如红斑性狼疮类风湿关节炎症疾、麻风麻疹等病人血清也可呈现假阳性结果，必须结合临床资料进行判断和分析。(2)梅毒螺旋体抗原试验：采用挴毒螺旋体N ichols或Reiter株作为抗原，检测病人血清中特异性抗体，特异性较高，但操作繁琐，用千梅毒确诊。国内较常用的梅毒螺旋体抗原试验有梅毒螺旋体血凝试验(trepon emal pallidum hemagglutination assay, TPHA)和梅毒螺旋体明胶凝集试验(lreponemal pallidum p狙tid e agglutin ation assay,TPPA)，其次尚有梅毒螺旋体抗体微扯血凝试验（血crohemagglutination assay for antibody to Treponema pallidum,MH A-TP)和荧光密螺旋体抗体吸收(fluorescent treponemal antibody-absorption, Fl'A-ABS)试验等。梅毒螺旋体制动(treponemal pallid um immobilizing, TPl)试验用于检测血清标本中是否存在能抑制梅毒螺旋体活动的特异性抗体，虽有较高特异性，但需使用大量的活梅毒螺旋体，现已很少使用。此外，近年文献报道以一种或多种重组TpN蛋白为抗原的ELIS人梅毒螺旋体IgG抗体捕获E LISA、免疫印迹法等，也有较好的检测效果。


医学微生物学 （三）微生物学检查 由于新生儿先天性梅毒易受过继免疫的抗体干扰，部分患儿不产生特异性IgM，故诊断较为困难。当肪血特异性抗体明显高于母体、患儿有较高水平特异性抗体或抗体效价持续上升时才有辅助诊断价值。（四）防治原则梅毒是性传播性疾病，加强性卫生教育和注重性卫生是减少梅毒发病率的有效措施。梅毒确诊后，应尽早予以彻底治疗，目前多采用青霉素类药物治疗3个月至1年，以血清抗体转阴为治愈指标，且治疗结束后需定期复查。目前尚无梅毒疫苗。 第二节诺卡菌属 诺卡菌属(Nocardia)有51个菌种，广泛分布于土壤，不属于人体正常菌群。对人致病的主要有星形诺卡菌(N. asteroides)、巴西诺卡菌(N. brasi/iensis)和鼻疽诺卡菌(N. farcinica)，其中星形诺卡菌致病力最强，在我国最常见。 第十八章原体 支原体(Mycoplasma)是一类缺乏细胞壁、呈高度多形性、能通过滤菌器、在无生命培养基中能生长繁殖的最小原核细胞型微生物。该微生物由Noccard等千1898年首次分离，1967年被正式命名为支原体。


医学微生物学 第一节概述 根据16SrRNA和23S rRNA进化树同源性分析，将立克次体目(R ickettsiales)分为三个科，即立克次体科(Rickettsiaceae)、无形体科(Anaplasmataceae)和全抱菌科(Ho losporaceae)。过去曾经归类千立克次体目的巴通体属现归于根瘤菌目巴通体科，柯克斯体属现归于军团菌目柯克斯体科。目前发现对人类有致病作用的立克次体主要包括：立克次体属的斑疹伤寒群(typhus group)与斑点热群(spotted fever group)立克次体；东方体属的恙虫病东方体(0. tsutsugamus加）；无形体属的嗜吞噬细胞无形体(A. phagocyt ophilum)；埃里希体属的查菲埃里希体(E. ch affeensis)和伊文埃里希体(E. ewingii)；新立克次体属的腺热新立克次体(N. sennetsu)。由于节肢动物传播媒介的地理分布不同，各种立克次体病的流行具有明显的地区性。近年来世界范围内新发立克次体病不断出现，如人粒细胞无形体病及人单核细胞埃里希体病等。常见立克次体的分类、所致疾病、流行环节和地理分布见表19-1。


医学微生物学 支原体葡萄糖精氨酸尿素pH吸附细胞 肺炎支原体+7.5红细胞生殖支原体+7.5红细胞人型支原体+7.3发酵支原体++7.5嗜精子支原体+7.0穿透支原体++7.5红细胞，CD4+T细胞脉原体+6.0红细胞a4.抗原构造主要由支原体细胞膜上的蛋白和糖脂组成。各种支原体均有其独特的抗原构造，交叉较少，可用于鉴定支原体。采用补体结合试验可检测支原体糖脂类抗原，采用ELISA可检测蛋白类抗原。支原体特异性抗体可用于生长抑制试验(growth inh加Lion test, GIT)和代谢抑制试验(me tabolic inhib山on test, MIT)，以鉴定支原体，其特异性与敏感性均高。GIT操作步骤与药敏试验的纸片法相似，将含有特异性抗体的纸片贴于接种有支原体的琼脂平板表面，若两者相对应则纸片周围菌落生长受到抑制。MIT试验是将支原体接种千含抗体、pH指示剂与特异性底物的培养基中，若抗体与支原体相对应，则支原体的生长代谢受到抑制，培养基不变色。应用GIT和MIT还可将某些支原体分成若于血清型，如脉原体可分为l4个型。


医学微生物学 支原体葡萄糖精氨酸尿素pH吸附细胞 5抵抗力支原体因无细胞壁，对理化因素的抵抗力比细菌弱。对化学消青剂敏感，但对结晶紫、醋酸钝和亚啼酸钾等有抵抗力，故可作为支原体分离培养时防止杂菌污染的抑制剂。支原体对抑制细胞壁合成的青霉素等抗生素天然耐受，但对干扰蛋白合成的多西环素和交沙霉素等抗生素、作用DN A旋转酶而阻碍D NA复制的左旋氧氛沙星和司帕沙星等1座诺酮类抗生素敏感。 第二节主要致病性支原体一、肺炎支原体（一）生物学性状 大小为0.2-0.3µm，呈高度多形性，如球形、球杆状、棒状、分枝状和丝状等。基因组大小为835kb, G+C mol％为38.6%。初次分离应培养于含足量血清和新鲜酵母浸出液的培养基中，一般10天左右长出致密圆形、深入琼脂、无明显边缘的菌落。多次传代后，生长加快，菌落呈“油煎蛋”状。肺炎支原体能发酵葡萄糖，不能利用精氨酸与尿素，能产生过氧化氢，对豚鼠红细胞呈B溶血，对亚甲蓝、醋酸钝和青霉素不敏感。（二）致病性与免疫性肺炎支原体主要经飞沫传播，一年四季均可发病，但夏末秋初多发，以5~15岁的青少年发病率最高。


医学微生物学 第二节主要致病性支原体一、肺炎支原体（一）生物学性状 肺炎支原体以其顶端结构中的Pl表面蛋白(170kD)和P30(32kD)为主要黏附因子，使肺炎支原体黏附于呼吸道上皮细胞表面，定植后侵入细胞间隙，产生代谢产物过氧化氢，使宿主细胞的触酶失去活力，纤毛运动减弱、停止乃至脱落消失，RNA及蛋白合成减少，细胞功能受损乃至死亡脱落。肺炎支原体脂蛋白能刺激炎症细胞在感染部位释放大量TNF-0'.、IL-1、IL-6等促炎细胞因子引起组织损伤。社区获得性呼吸窘迫综合征毒素(community-acquired respiratory distress syndrome toxin, CARDS)是一种外毒素，可激活炎症小体，分泌IL-1[3引起炎症反应。此外，肺炎支原体黏附宿主细胞后，还通过与TLR4相互作用诱导巨噬细胞自噬，使其增强促炎细胞因子的合成与分泌。


医学微生物学 第二节主要致病性支原体一、肺炎支原体（一）生物学性状 肺炎支原体感染引起的病理改变以间质性肺炎为主，又称原发性非典型性肺炎(primary atypical pneumonia)，临床症状较轻，以咳嗽、发热、头痛、咽喉痛和肌肉痛为主。5~10天后症状消失，但肺部X线改变持续4~6周才能消退。有时可并发支气管肺炎，个别病入可发生呼吸道外并发症，如皮疹、心血管和神经系统症状，这可能与免疫复合物和自身抗体有关。肺炎支原体感染后可产生slg人血清特异性lgM与lgG及致敏淋巴细胞，但抗体的保护作用有限。呼吸道局部黏膜产生的slgA有较强的防止再感染作用。肺炎支原体感染后可出现lgE介导的I型超敏反应，可使哮喘病急性发作。


医学微生物学 二、脤原体 （一）生物学性状脉原体直径为0.05-0.3µm，多呈单个或成双排列。基因组大小为750kb, G+C mol%为27.5%-28.5%，有613个蛋白编码基因，39个RNA基因，占基因组93%。生长时除需胆固醇外，还须添加酵母浸液。在固体培养基上，48小时后长出直径15-30µm的“油煎蛋＂样菌落。能分解尿素，不分解糖类和精氨酸，磷脂酶阴性，四嗤氮盐还原阴性。最适pH为5.5-6.5。对1:2000的醋酸钝不敏感。在液体培养基中生长后分解尿素产生NH3，使pH上升而导致自身死亡。根据细胞膜多带抗原(MB-Ag)不同，将解脉脉原体分为14个血清型或2个生物型。生物1型(2、4、5工8、9、10、11、12、13血清型）均有16和17kD多肤，生物2型(1、3、6、14血清型）仅有17kD多肤。根据16S rRNA基因和16-23S rRNA间区序列差异，将14个血清型分为2个种，即解脉脉原体和微小豚原体。


医学微生物学 （吴移谋）第十九章立克次体 立克次体(ricketts i a)是一类以节肢动物为传播媒介、严格细胞内寄生的原核细胞型微生物。立克次体由美国病理学和微生物学家Howard Tay lor Ri cketts千1909年首先发现，为纪念他在研究期间不幸感染斑疹伤寒而献身，故以他的名字命名这一类微生物。1934年，我国学者谢少文首先应用鸡胚成功地培养出立克次体，为人类认识立克次体作出了重大贡献。


医学微生物学 属群种所致疾病传播媒介储存宿主地理分布 立克次体属斑疹伤寒群普氏立克次体流行性斑疹伤寒人乱人世界各地斑疹伤寒立克次体地方性斑疹伤寒鼠蛋、鼠乱啃齿类世界各地斑点热群立氏立克次体落矶山斑点热婢咄齿类、犬西半球澳大利亚立克次体昆士兰婢热婢呐齿类溃大利亚康诺尔立克次体地中海斑点热婢咄齿类、犬地中海地区、非西伯利亚立克次体北亚婢传斑点热婢嗤齿类北亚、蒙古小珠立克次体立克次体狗蜡鼠美国、东北亚、(R. akan)南非东方体属恙虫病东方体恙虫病恙蜡啃齿类亚洲、大洋洲属群种所致疾病传播媒介储存宿主地理分布无形体属嗜吞噬细胞无形体人粒细胞无形体病婢咽齿动物、美洲、欧洲、亚洲埃里希体属查菲埃里希体人单核细胞埃里婢犬、鹿、嗤齿美洲、欧洲、亚洲新立克次体屈腺热新立克次体腺热吸虫鱼类？日本、马来西亚立克次体的共同特点包括：心为革兰阴性细菌；＠有细胞壁，但形态多样；＠专性活细胞内寄生，以二分裂方式繁殖；＠以节肢动物作为传播媒介或储存宿主；＠多数是人畜共患病的病原体，在人类引起发热出疹性疾病；＠对多种抗生素敏感。


医学微生物学 学菌酱氏立克次体斑疹伤寒立克次体立氏立克次体有有无无无无有有有无无无内皮细胞分散于细胞质内++++内皮细胞分散于细胞内外++++内皮细胞细胞质内和核质区+＋＋＋或＋二、致病性和免疫性 1流行环节在立克次体的生命周期中，至少有一个阶段寄生于节肢动物宿主，包括婢、蜡、乱、圣或其他昆虫，可经卵传播，并以节肢动物作为传播媒介感染脊椎动物宿主，其中咭齿类动物常成为寄生宿主和储存宿主。2所致疾病大多数立克次体可引起人畜共患病，并且多为自然疫源性疾病，有明显的地区性。临床表现以发热、头痛、皮疹、肝脾大等为特征。常见立克次体的所致疾病见表19-1。


医学微生物学 学菌酱氏立克次体斑疹伤寒立克次体立氏立克次体有有无无无无有有有无无无内皮细胞分散于细胞质内++++内皮细胞分散于细胞内外++++内皮细胞细胞质内和核质区+＋＋＋或＋二、致病性和免疫性 3.致病机制立克次体经皮肤、结膜或黏膜侵入人体后，通过淋巴管及血流播散至全身。立克次体属主要侵犯小血管及毛细血管内皮细胞，其入侵细胞的主要因素包括：O黏附素OmpA和OmpB与宿主细胞表面受体的结合；＠磷脂酶A的溶膜作用；＠菌体细胞膜上附着的W型分泌系统(T4SS)将立克次体的DNA和蛋白质转运入宿主细胞质。立克次体进入胞质大量繁殖，产生脂多糖等毒性代谢产物，引起血管内皮细胞病变。当细胞裂解，大量立克次体进入血液形成立克次体血症，使机体主要脏器的内皮细胞受到感染。立克次体对血管内皮细胞的直接损伤和释放的内毒素引起病理生理损伤，包括广泛的血管炎症、通透性增加、水肿、低血容量以及促凝血和纤维蛋白溶解系统的激活。病程第2周出现的超敏反应加重病变。埃里希体屈和无形体属主要感染骨髓来源细胞，如粒细胞、单核细胞、红细胞和血小板，致病机制主要是通过影响宿主细胞基因转录、细胞凋亡、细胞因子产生以及吞噬功能等造成免疫病理损伤。


医学微生物学 学菌酱氏立克次体斑疹伤寒立克次体立氏立克次体有有无无无无有有有无无无内皮细胞分散于细胞质内++++内皮细胞分散于细胞内外++++内皮细胞细胞质内和核质区+＋＋＋或＋二、致病性和免疫性 4.免疫性机体的康复依赖于特异性抗立克次体免疫，包括T细胞介导的细胞免疫，细胞因子激活和增强吞噬细胞的杀灭作用，以及特异性抗体的产生。特异性抗体(IgG和IgM)对胞内寄生的立克次体不能发挥清除作用，但可促进巨噬细胞的吞噬、中和毒性物质以及减缓感染的发展。细胞免疫的建立也伴随着免疫病理的出现，表现为以血循环中CD; T细胞减少、血管周围CD4+T细胞、CD8+T细胞、B细胞以及巨噬细胞浸润为特征的立克次体血管炎。 第二节主要致病性立克次体—、普氏立克次体 普氏立克次体(R. prowazekii)是流行性斑疹伤寒(ep idemic typhus)或称乱传斑疹伤寒(louse-bornet y phus)的病原体，为纪念首先发现该病原体并在研究中不幸感染而故的捷克科学家S t a n is l av vonProwazek而命名。


医学微生物学 第十九章立克次体177 2.培养特性常采用鸡胚成纤维细胞、L929细胞和Vero细胞进行分离和培养。鸡胚卵黄襄接种亦用于普氏立克次体的传代培养。传统的动物接种分离法，如接种成年雄性豚鼠和小鼠，因较繁琐，现较少使用。3抗原构造有两类抗原，一类为不耐热的种特异性抗原，主要由外膜蛋白构成；另一类为耐热的群特异性脂多糖抗原。与普通变形杆菌x\9和X2菌株有共同多糖抗原成分。立克次体能保持活性两个月左右。对四环素类和氯霉素类抗生素敏感。磺胺可刺激其繁殖。


医学微生物学 二、斑疹伤寒立克次体 斑疹伤寒立克次体(R. typhi)是地方性斑疹伤寒(end emic typhus)或称鼠型斑疹伤寒(murin e typhus)的病原体。为纪念Mooser等于1931年首先分离出该立克次体，又称为莫氏立克次体(R. mooseri)。（一）生物学性状斑疹伤寒立克次体的形态与染色性、菌体结构、抗原构造、培养特性和抵抗力均与普氏立克次体相似，但斑疹伤寒立克次体可分布于感染细胞内外且链状排列少见。（二）致病性和免疫性1流行环节斑疹伤寒立克次体的主要传染源和储存宿主为嗤齿类动物（主要为鼠），鼠蛋和鼠乱是主要传播媒介，通过鼠圣和鼠乱在鼠间传播。当鼠圣叮咬入时，可将斑疹伤寒立克次体传染给入，再通过人乱在入群中传播。斑疹伤寒立克次体在鼠圣肠管上皮细胞内增殖，破坏细胞，并随粪便排出，但鼠蛋一般不因感染而死亡，故鼠圣亦是储存宿主。人也可通过口、鼻和眼结膜等途径接触鼠圣粪便而受染。


医学微生物学 二、斑疹伤寒立克次体 2所致疾病斑疹伤寒立克次体的致病物质和致病机制与普氏立克次体相似。地方性斑疹伤寒的临床症状也与流行性斑疹伤寒相似，但相对较轻，很少累及中枢神经系统和心肌，死亡病例少见。3.免疫性以细胞免疫为主，体液免疫为辅。病后可获得较牢固的免疫力，与普氏立克次体的感染有交叉免疫力。（三）微生物学检查法检查方法与流行性斑疹伤寒的检查相似，常用间接免疫荧光法进行血清学诊断。（四）防治原则预防措施主要为灭乱、灭圣和灭鼠。治疗原则与流行性斑疹伤寒的治疗相似，包括对症治疗和使用四环素类药物进行抗菌治疗。


医学微生物学 三、恙虫病东方体 恙虫病东方体(0. tsutsugamus加）原称恙虫病立克次体(R. tsutsugamus加）或东方立克次体(R. orientalis)，是恙虫病(tsutsugamushi小sease)或称丛林斑疹伤寒(scrub typhus)的病原体。恙虫病属自然疫源性疾病，临床上以发热、焦痐或溃疡、淋巴结肿大及皮疹为主要特征。（一）生物学性状1形态与染色呈多形性，以短杆状或球杆状多见，大小为(0.2-0.6)µ,mx(O.5-1.5)µ,m。Gie msa染色呈紫色或蓝色，Gime nez染色呈暗红色，Mac c hi avell o染色呈蓝色。在感染细胞内密集分布于胞质内近核旁。2结构细胞壁的结构不同千立克次体属，无肤聚糖、脂多糖和微荚膜样黏液层。与奇异变形。 第十九章立克次体 杆菌XK株有共同的多糖抗原。3培养特性对豚鼠不致病，小鼠易感。可在鸡胚卵黄痰和原代或传代细胞中生长。常用的原代细胞有地鼠肾细胞、睾丸细胞，传代细胞有Vero细胞、L929细胞等。4.抵抗力抵抗力较立克次体属弱，离开宿主后，37"C2~3小时后活力大为下降。对常用消毒剂敏感。


医学微生物学 3免疫性以细胞免疫为主，病后获得较为待久的免疫力。（三）微生物学检查 恙虫病的样本采集、实验室诊断方法与立克次体属相似，包括病原体分离培养和鉴定、血清特异性抗体检测和样本中特异性核酸的分子生物学检测。病原体的分离必须在生物安全三级实验室进行。常取急性期病人血液标本接种小鼠腹腔，也可采用鸡胚卵黄痰接种和细胞培养法进行病原体的分离。 四、嗜吞噬细胞无形体 嗜吞噬细胞无形体(A. phagocytophilum)，曾称人粒细胞埃里希体(Human驴·anulocytic Ehrlichiae),原为埃里希体属，现归类于无形体属，是无形体属中对人致病的主要病原体，可引起人粒细胞无形体病(h uman granulocytic anaplasmosis, HGA)。嗜吞噬细胞无形体菌体呈球形、卵圆形、梭形等多种形态，革兰染色阴性，为专性胞内寄生菌，主要寄生在中性粒细胞的胞质，以膜包裹的包涵体形式繁殖。用Wri g h t染色或改良Wrigh t-Giemsa染色呈紫色或蓝色，类似衣原体包涵体，称桑甚体(morulae)。嗜吞噬细胞无形体的体外分离培养使用人粒细胞白血病细胞系(HL-60)。


医学微生物学 四、嗜吞噬细胞无形体 嗜吞噬细胞无形体的储存宿主是哺乳动物，其中啃齿动物是其最大的储存宿主类群，其中以小家鼠和褐家鼠感染的报导居多，白足鼠和沙鼠等野生鼠类带菌率也较高，其他宿主包括白尾鹿、红鹿以及牛、山羊等多种家畜和家犬。硬婢是该菌的主要传播媒介，包括美国的肩突硬婢和太平洋硬婢，欧洲的笢子硬婢，以及我国的全沟硬婢等，主要通过硬婢叮咬传播，直接接触危重病人或带菌动物的血液等体液也可能导致传播。人对该病普遍易感，高危人群主要为接触婢等传播媒介的人群，如疫源地。（主要为森林、丘陵地区）的居民、劳动者及旅游者等。与罹患该病的危重病人密切接触的医务人员或陪护者，若防护不当，也有被感染的可能。首例诊断的HGA病入是1990年美国的1例被婢叮咬者。近年来，美国、欧洲和亚洲的一些国家均有病例报道。2006年安徽某医院暴发的群体性不明原因发热疫情，由中国疾病预防控制中心确诊为HGA，此后，在黑龙江、内蒙古、湖北、河南、山东、北京、天津、新疆、四川、云南、海南等地均发现感染病入或疑似病人，为我国重要的新发自然疫源性疾病。


医学微生物学 四、嗜吞噬细胞无形体 目前认为HGA发病的机制主要包括嗜吞噬细胞无形体直接损伤宿主细胞，抑制中性粒细胞的呼吸爆发，以及机体的免疫应答使淋巴细胞和吞噬细胞在感染部位浸润并释放大量的细胞因子，造成或加重感染后局部组织的炎性损伤。病人大多急性起病，主要临床特征为发热伴白细胞、血小板减少和多脏器功能损害。重症病入可有间质性肺炎、肺水肿、急性呼吸窘迫综合征以及继发细菌、病毒和真菌感染。HGA的临床诊断须依据流行病学史、临床表现和实验室检查综合分析。微生物学检查常用间接免疫荧光法检测嗜吞噬细胞无形体IgM或IgG抗体，也采用PCR检测全血或血细胞标本中嗜吞噬细胞无形体特异性核酸，并进行序列分析，同源性达99％以上可诊断。必要时分离病原体。HGA病人极易发生多器官受累，甚至死亡。因此，临床上高度怀疑无形体病时，经验用药是关键，采用多西环素或四环素。儿童或对多西环素过敏者，可选用利福平。禁用磺胺类药物。无形体尚无特异性疫苗，避免蟀叮咬是降低感染风险的主要措施。出现暴发疫情时，应采取灭杀婢、鼠和环境清理等措施。对病人的血液、分泌物、排泄物及被污染的环境和物品，应进行消毒处理。


医学微生物学 五、查菲埃里希体 查菲埃里希体(E. chajfeens区）可引起人单核细胞埃里希体病(human monocyticelu·lichiosis,HME)。查菲埃里希体的形态结构与嗜吞噬细胞无形体相似，为严格细胞内寄生的革兰阴性小细菌，但感染的靶细胞主要为单核细胞和巨噬细胞，其在细胞质内繁殖，积聚千细胞空泡内，形成形似桑其的包涵体。该病原体于1986年首次在美国从一个被婢叮咬后严重发热病人分离得到。2012年，美国疾病预防控制中心接到HME疫报超过8523例。近年来发现HME也存在于欧洲和亚洲地区。我国云南、浙江、黑龙江大兴安岭地区和山东等地有通过间接免疫荧光法、PCR扩增和测序技术诊断的HME病例。


医学微生物学 五、查菲埃里希体 HME为自然疫源性疾病多种哺乳类动物为其储存宿主和传染源，包括鹿、鼠类、犬、马等。硬婢是主要传播媒介，经婢叮咬传播。临床表现无特异性，常为急性高热、全身不适、头痛、肌痛，部分病人有胃肠道（呕吐和腹泻）、呼吸道（咳嗽、咽痛等）或骨关节（关节痛）症状。严重病例可伴心、肝、肾等多脏器功能损害，出现肺水肿急性呼吸窘迫综合征，皮肤、肺、消化道等出血，以及继发细菌、病毒及真菌感染。少数病人可因呼吸衰竭、感染性休克、急性肾衰竭等多脏器衰竭，以及弥散性血管内凝血而死亡。在单核细胞内观察到典型＂桑楛状“包涵体，或以间接荧光抗体检测到相应抗原可确诊。在少数有条件的实验室，还可进行细胞培养和PCR检测。无特异性疫苗，一般预防和治疗原则与HGA的相似。 （陈峰宏）第二十章衣原体 衣原体(chlamydi ae)是一类严格真核细胞内寄生、具有独特发育周期、能通过细菌滤器的原核细胞型微生物，归属千广义的细菌学范畴。


医学微生物学 （陈峰宏）第二十章衣原体 衣原体的共同特性：心圆形或椭圆形，有细胞壁，革兰阴性；＠具有独特的发育周期，以二分裂方式繁殖；＠有DNA和RNA两种核酸；＠有核糖体；＠严格细胞内寄生，具有独立的酶系统，但不能产生代谢所需的能量，须利用宿主细胞的三磷酸盐和中间代谢产物作为能量来源；＠对多种抗生素敏感。


医学微生物学 （陈峰宏）第二十章衣原体 目前，根据16S rRNA和23S rRNA进化树同源性分析，衣原体分为独立的门(phy lum)，衣原体门包含独立的纲(class)和目(order)，其中衣原体目(Chlamydiales)分为8个科(family)、12个属(genus)、21个种。衣原体属有流产衣原体(Chlamydia abortus)、鸟衣原体(Chlamydia avium)、豚鼠衣原体(Chlamydia cav ia e)、猫衣原体(Chlamydia fe伈）、家禽衣原体(Chlamydia gallinacea)、朱鹭衣原体(Chlamydia如心）、鼠衣原体(Chlamydia muridarum)、兽类衣原体(Chlamydia pecorum)、肺炎衣原体(Chlamyd ia pneumoniae)、鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci)、猪衣原体(Chlamydia suis）和沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)12个种，其中鸟衣原体、家禽衣原体和朱鹭衣原体是新发现的衣原体种。对人致病的衣原体主要有4个种（表20-1)。


医学微生物学 （陈峰宏）第二十章衣原体 性状沙眼衣原体肺炎衣原体鹦鹉热衣原体兽类衣原体自然宿主人、小鼠人鸟类、低等哺乳动物牛、羊原体形态圆形、椭圆形梨形圆形椭圆形圆形基因组(bp)1044459I2302301169374I106197G+C(mol%)41-44.24041.339.3DNA同源性（同种不同菌株间）>90%>90%14%-95%88%-100%质粒+-(Nl6株除外）+++?注：Pmp:polymorphicmembrane proteins（多形态膜蛋白） 第一节概述一、生物学性状 1基因组衣原体基因组为环状闭合的双链DNA，大小为1.0-1.24Mb。含有约7.5kb大小的质粒，为环状闭合的双链DNA，由8个可读框(ORF)组成并编码8种蛋白。衣原体质粒不通过接合传递、不编码耐药基因、无整合功能，但能适应不同的宿主，这对其维持相关功能、促进感染具有重要作用。


医学微生物学 第一节概述一、生物学性状 原体呈球形、椭圆形或梨形，直径0.2~0.4µm。普通光学显微镜下勉强可见，电镜下观察可见有细胞壁，中央有致密的类核结构，是发育成熟的衣原体。Giemsa染色呈紫色，Macc h iavello染色呈红色。原体具有强感染性，在宿主细胞外较为稳定，但无繁殖能力。当原体进入宿主易感细胞后，宿主细胞膜围绕原体形成空泡，称为包涵体(in cl u sion body)，原体在空泡中逐渐发育形成网状体。网状体又称始体(ini ti a l body)，体积较大，直径0.5~1. Oµm，圆形或椭圆形。电子密度较低，无胞壁，代谢活跃，以二分裂方式繁殖，在空泡内增殖后形成许多子代原体。成熟的子代原体从感染细胞中释放后，再感染新的易感细胞，重复上述发育周期。每个发育周期约24~72小时。网状体是衣原体发育周期中的繁殖型，不具感染性，Macc h ive ll o染色呈蓝色。原体与网状体的性状比较见表20-2。


医学微生物学 第一节概述一、生物学性状 性状原体网状体性状原体网状体大小（直径µm)0.2-0.40.5~I.0感染性+细胞壁+繁殖能力+代谢活性++RNA:DNA l:I3:I胞外稳定性+细胞毒性+3培养特性衣原体专性细胞内寄生，大多数衣原体能在6~8日龄鸡胚卵黄袋中繁殖，感染3~6天可致鸡胚死亡，鸡胚卵黄襄膜中可见包涵体、原体和网状体。组织细胞培养时，可在HeLa、McCoy或HL等细胞中生长良好。但衣原体多缺乏主动穿入组织细胞的能力，故通常将接种衣原体标本的细胞离心沉淀以促使其穿入细胞，细胞培养物中加入二乙氨基葡聚糖(DEAE-dextran)和细胞松弛素B等细胞代谢抑制物，或先用X线照射，使细胞处千非分裂状态，其目的在千使细胞生长代谢缓慢，有利千衣原体的寄生性生长和繁殖。


医学微生物学 第一节概述一、生物学性状 4.抗原结构根据细胞壁的抗原成分不同，可将衣原体抗原分为属、种、型特异性抗原：心属特异性抗原：位千细胞壁的共同抗原为脂多糖，类似于革兰阴性菌的脂蛋白脂多糖复合物，可用补体结合试验进行检测；＠种特异性抗原：大多数衣原体的种特异性抗原为主要外膜蛋白(major ouler membrane protein, MOMP)，可用补体结合试验和中和试验进行检测，可鉴别不同种衣原体；＠型特异性抗原：根据MOMP可变区氨基酸序列的不同，可将每种衣原体分为不同的血清型或生物型(biovar)，常。 用的检测方法是单克隆抗体微量免疫荧光试验。 5.抵抗力衣原体耐冷不耐热，60屯仅能存活5~10分钟，－60屯其感染性可保持5年，液氮内可保存10年以上，冷冻干燥保存30年以上仍可复苏。对常用消毒剂敏感，0.1％甲醋溶液24小时、2％氢氧化钠或1％盐酸2~3分钟、75％酒精溶液l分钟即可灭活。紫外线照射可迅速灭活。红霉素多西环素、四环素和氯霉素具有抑制衣原体繁殖的作用。


医学微生物学 衣原体血清型感染部位所致疾病 沙眼衣原体A,B,Ba,C眼沙眼D~k眼包涵体结膜炎、新生儿眼炎D~k生殖道（男）尿道炎，附睾炎，前列腺炎D~k生殖道（女）尿道炎，宫颈炎，子宫内膜炎，输卵管炎，肝周炎，流产，早肺炎衣原体呼吸道咽炎，支气管炎，肺炎鹦鹉热衣原体（鸟株）呼吸道鹦鹉热，鸟疫3免疫性衣原体感染后，能诱导机体产生特异性细胞免疫和体液免疫，但以细胞免疫为主。MOMP活化的CD4. Th细胞分泌细胞因子，可抑制衣原体的繁殖。特异性中和抗体可阻断衣原体吸附于宿主细胞，故有抗衣原体感染的中和作用。机体对衣原体的免疫力往往不强且较为短暂，因而常造成衣原体反复感染、持续性感染或隐性感染。此外，衣原体感染时也可出现免疫病理损伤，主要由迟发型超敏反应所致，如性病淋巴肉芽肿等。 第二节主要病原性衣原体—、沙眼衣原体 根据侵袭力和引起人类疾病的部位不同，将沙眼衣原体分为三个生物型：即沙眼生物型(biovar trachoma)生殖生物型(biovar genital)和性病淋巴肉芽肿生物型(biov狙'lympho驴·anuloma venereum, LGV)。


医学微生物学 4.婴幼儿肺炎生殖生物型D~K血清型均可引起婴幼儿肺炎。 5.性病淋巴肉芽肿由沙眼衣原体LGV生物型Ll、I2、I2a和L3血清型引起。人是LGV的自然宿主，主要通过性接触传播。此类衣原体侵犯男性腹股沟淋巴结，引起化脓性淋巴结炎和慢性淋巴肉芽肿，常形成疫管；亦可侵犯女性会阴、肛门、直肠，引起会阴－肛门－直肠组织狭窄。LGV也可引起结膜炎并伴有耳前、颌下及颈部淋巴结肿大。沙眼衣原体为细胞内寄生的病原体，故抗感染免疫以细胞免疫为主。主要由MOMP活化的CD4+T细胞释放细胞因子激活单核巨噬细胞，从而破坏和清除感染或未感染的黏膜细胞，不仅产生病理性损害，也易引起继发性感染。特异性中和抗体可与衣原体结合，阻断衣原体与宿主细胞膜上的受体结合，使其不能进入宿主细胞内繁殖。由于沙眼衣原体型别多、MOMP易变异，故病后建立的抗感染免疫力不持久，仍可发生再感染。


医学微生物学 4.婴幼儿肺炎生殖生物型D~K血清型均可引起婴幼儿肺炎。 （三）微生物学检查法多数衣原体引起的疾病可根据临床症状和体征确诊。例如，急性期沙眼或包涵体结膜炎病入，通过其特殊的症状和体征即可作出诊断，实验室检查可取眼结膜刮片或眼穹隆部及眼结膜分泌物涂片镜检。对泌尿生殖道感染者，由于临床症状常不典型，因而实验室检查较为重要，可采集泌尿生殖道拭子、宫颈刮片、精液或其他病灶部位活检标本，也可采集初段尿离心后涂片。LGV病人采集淋巴结脓肿、脓液、生殖器溃疡或直肠病灶组织标本。标本最好用膜式滤菌器除去杂菌，不加抗生素。若用于细胞培养，应注意标本的保存并及时接种千培养细胞中。衣原体标本的运送常用含抗生素的二磷酸荒糖(2SP)运送培养基。若标本在2小时之内接种，阳性检出率最高。应(LCR)检测沙眼衣原体DNA。抗原或核酸检测沙眼衣原体具有快速、敏感、特异等优点。


医学微生物学 二、肺炎衣原体 肺炎衣原体是衣原体属的一个新种。最初分离的两株病原体：1965年自我国台湾一名小学生眼结膜中分离的TW-183(Taiwan-183)株和1983年自美国西雅图一位急性呼吸道感染病人咽部分离的AR-39(acute resp i ratoi-y-39)株。但此后发现这两株衣原体为同一菌株，故命名为TWAR。（一）生物学特性原体直径为0.38µm，呈梨形，有清晰的周浆间隙，在胞质中还有数个电子致密的圆形小体存在。网状体的特征与沙眼衣原体和鹦鹉热衣原体类似。Giemsa染色呈紫红色，该法对细胞内包涵体的定位比殃染法敏感。肺炎衣原体是较难培养的微生物。最早用千肺炎衣原体体外培养的是McCoy和HeLa细胞，但均难于连续传代。目前常用Hep-2和HL细胞在培养肺炎衣原体的敏感性高于McCoy和HeLa细胞。根据16S rRNA、23S rRNA、ompA基因序列和某些生物学特性差异，肺炎衣原体可分为三个生物型：人生物型、考拉生物型和马生物型。根据ompA基因VD4区序列分析结果，肺炎衣原体可能存在不同的血清型。


医学微生物学 二、肺炎衣原体 肺炎衣原体与其他衣原体的DNA同源性小千10%，而不同来源的肺炎衣原体株具有94％以上的DNA同源性，且其限制性内切酶图谱相同。肺炎衣原体抗原主要有两种，即脂多糖(LPS)抗原和蛋白抗原。LPS为衣原体属特异性抗原，不仅含有衣原体属特异性抗原决定簇，也含有与其他微生物LPS发生交叉反应的抗原表位。蛋白抗原186第一篇细菌学主要是MOMP，为衣原体外膜复合物(omC)的主要组分，暴露于衣原体表面并具有较强的免疫原性，在肺炎衣原体诊断和疫苗研制中有潜在的应用价值。 （三）微生物学检奎法 1.病原学检查常采集痰标本、鼻咽拭子及支气管肺泡灌洗液。直接涂片后先观察包涵体，再用荧光或酶标记的种特异性单克隆抗体检测标本中肺炎衣原体抗原。此方法特异性高，与其他衣原体无交叉反应，但易受多种因素千扰，敏感性不高。必要时可采用组织培养或动物接种分离病原体，然后Gi emsa或Macchi avello染色镜检原体或网状体。


医学微生物学 （三）微生物学检奎法 2血清学方法微量免疫荧光试验(MIF)是目前检测肺炎衣原体感染最常用且较敏感的血清学方法，被称为“金标准＂。该试验可分别测定血清中特异性lgM和lgG抗体，可区别近期感染和既往感染，也有利于区别原发感染和继发感染。凡双份血清抗体滴度增高4倍或以上，或单份血清IgM抗体滴度;:,:1:16、IgG抗体滴度;:,:1:512，可确定为急性感染，IgG习16表示为既往感染。3. PCR根据肺炎衣原体的16S rRNA基因或MOMP编码基因的保守序列设计特异性引物，采用PCR检测特异性DNA片段，可用于临床标本的快速诊断。 三、鹦鹉热衣原体 鹦鹉热是由鹦鹉热衣原体引起的一种自然疫源性疾病。该衣原体主要在鸟类及家禽中传播，广泛分布千世界各地，我国于20世纪60年代初证实有该病流行。鹦鹉热一般呈散发型，偶有小范围的暴发或流行。（一）生物学性状原体直径为02~05µm，呈球形或卵圆形。网状体直径为0.6~15µm，呈球形或不规则形态。原体在细胞空泡中增殖，形成结构疏松、不含糖原、磺染色呈阴性的包涵体。


医学微生物学 三、鹦鹉热衣原体 采用血清学分类法，鹦鹉热衣原体至少可以分为9个血清型，分别为A、B、C、D,E、F,E/B、WC和M56型，其中A~F和E/B血清型的自然宿主为鸟类，A型和D型毒力较强，能引起鸟类的急性感染。A型也是感染人类的常见血清型。鹦鹉热衣原体在6~8日龄鸡胚卵黄褒中生长良好。在HeLa细胞、McCoy细胞、猴肾细胞(BSCl)及HL细胞中均可生长。易感动物为小鼠。（二）致病性与免疫性人类主要经呼吸道吸入病鸟粪便、分泌物或羽毛的气雾或尘埃而感染，也可经破损皮肤、黏膜或眼结膜感染。潜伏期为5~21天（最短3天，最长可达45天）。临床表现多为非典型性肺炎，以发热、头痛、干咳、间质性肺炎为主要症状，偶尔可发生系统性并发症，如心肌炎、脑炎、心内膜炎与肝炎、肝脾肿大等。外周血白细胞计数正常或略有增多。约有50%～95％病入胸片显示为片状、云絮状、结节状或粟粒状阴影，由肺门部向外呈樑形或扇形扩大，也可表现为大叶性肺炎。机体抗鹦鹉热衣原体感染以细胞免疫为主。MOMP能刺激机体产生特异性中和抗体，抑制衣原体的增殖。此外，MOMP还可激活CD4+T与CD8+T淋巴细胞，对清除细胞内衣原体和抵抗再次感染具有重要作用。


医学微生物学 （吴移谋）第二十一章螺旋体 螺旋体(spirochete)是一类细长、柔软、弯曲、运动活泼的原核细胞型微生物，生物学地位介千细菌与原虫之间。螺旋体的基本结构及生物学性状与细菌相似，如有原始核质、类似革兰阴性菌的细胞壁、二分裂方式繁殖以及对多种抗生素敏感等，故生物分类学上将螺旋体列入广义的细菌学范畴。螺旋体在自然界和动物体内广泛存在，种类繁多，其中部分螺旋体可引起人类疾病（表21-1)。分类的主要依据是其螺旋数目、螺旋规则程度和螺旋间距。对人致病的螺旋体主要分布千如下三个属：钩端螺旋体属、密螺旋体属和疏螺旋体属。钩端螺旋体属(Leptospira)：螺旋细密规则，一端或两端弯曲成钩状，故名钩端螺旋体，其中问号钩端螺旋体(L. interrogans)等致病性钩端螺旋体对人和动物致病。密螺旋体属(Treponema)：螺旋较为细密规则，两端尖细，其中苍白密螺旋体苍白亚种、苍白密螺旋体极细亚种和品他螺旋体对人致病。疏螺旋体属(Bo rrelia.)：有3~l0个稀疏不规则的螺旋，呈波纹状，其中伯氏疏螺旋体、回归热螺旋体和奋森疏螺旋体对人致病。


医学微生物学 第一节钩端螺旋体属 钩端螺旋体隶属于螺旋体目(Sp irochae lales)钩端螺旋体科(Leplospiraceae)钩端螺旋体属(Leptospira)。钩端螺旋体属可分为致病性和非致病性两大类。由致病性钩端螺旋体感染引起的钩端螺旋体病(l eptosp订OS I S)是全球流行的人畜共患病(zoonos i s)，我国除新疆、西藏、青海、宁夏和甘肃尚未肯定有钩端螺旋体病流行外，其余地区均有钩端螺旋体病的流行，因而该病是目前我国重点防控的13种传染病之一。 二、流行环节 钩端螺旋体病是一种典型的人畜共患病。全世界至少发现约200余种动物可携带致病性钩端螺旋体我国已从50余种动物中检出致病性钩端螺旋体，其中以黑线姬鼠及猪、牛等家畜为主要储存宿主。动物感染钩端螺旋体后，大多呈隐性或轻症感染，少数家畜感染后可引起流产。钩端螺旋体在感染动物中长期生存并持续从尿液中排出，直接或经土壤间接污染水源（疫水）形成自然疫源地。入类接触疫水而被感染。


医学微生物学 二、流行环节 钩端螺旋体病也是一种典型的自然疫源性传染病，由于地理环境和宿主动物分布差异，不同国家或地区优势流行的致病性钩端螺旋体基因种以及血清群、型可有显著差异c我国流行最为广泛的致病性钩端螺旋体为问号钩端螺旋体基因种，其中南方地区黄疽出血群为主，北方地区波摩那群为主，流感伤寒、秋季、澳洲、七日热和赛罗群也较为常见，台湾地区流行的致病性钩端螺旋体为L. santarosai基因种。根据流行特征和传染源差异，可分为稻田型、雨水型和洪水型，稻田型主要传染源为野生鼠类，雨水型主要是家畜，洪水型两者兼之。由于钩端螺旋体能在水中长期存活及其疾病自然疫源性等特点，因而钩端螺旋体病是我国洪捞、地震等自然灾害中重点监控的四种传染病之一。 三、致病性和免疫性 1.致病物质至今未发现钩端螺旋体能产生任何典型的细菌外毒素。目前倾向于内毒素是钩端螺旋体主要致病物质。近年发现，黏附素和溶血素也可能在钩端螺旋体致病过程中发挥重要作用。


医学微生物学 三、致病性和免疫性 (1)黏附素：致病性钩端螺旋体能以菌体一端或两端黏附于细胞，已肯定的黏附素有24kD和36k D外膜蛋白以及钩端螺旋体免疫球蛋白样蛋白(l eptospiral i mmunogl ob uli n-l i k e protein, Lig),24kD外膜蛋白黏附素受体为胞外基质(extrace llu lar matrix, ECM)中的层粘连蛋白(lami n i n, LN),36kD外膜蛋臼黏附素和Lig黏附素受体为ECM中的纤维连接蛋白(fibronectin, FN)。(2)内毒素：重症钩端螺旋体病病人和实验感染动物可出现与革兰阴性菌内毒素反应相似的临床症状和病理变化，提示内毒素是钩端螺旋体主要致病物质。钩端螺旋体内毒素中脂质A结构与典型的细菌内毒素有所差异，其毒性较弱。


医学微生物学 三、致病性和免疫性 (3)溶血素：不少致病性钩端螺旋体能产生溶血素，体外可溶解人、牛、羊和豚鼠红细胞，注入体内能引起贫血、出血、肝大、黄疽和血尿。问号钩端螺旋体黄疽出血群赖株基因组中有9个溶血素编码基因，其中Sph2及SphH溶血素对多种哺乳类细胞有毒性。最近发现，多种间号钩端螺旋体赖株溶血素有很强的诱导单核－巨噬细胞产生TNF-a JL-l!3、IL-6等促炎细胞因子(proi nflammatory cytokines)的能力。 第二十一章螺旋体 眼结膜充血、浅表淋巴结肿大等。继而钩端螺旋体随血流侵入肝、脾、肾、肺、心、淋巴结和中枢神经系统等，引起相关脏器和组织损害并出现相应体征。由于感染的钩端螺旋体血清型、毒力和数量不同以及宿主免疫力差异，感染者临床表现差异很大。轻症者似流感，重症者可有明显的肺、肝、肾以及中枢神经系统损害，出现肺出血、黄疽、D1C、休克，甚至死亡。临床上根据病入主要受损的脏器或组织不同，分为流感伤寒型、肺出血型、黄疽出血型肾型和脑膜脑炎型。部分病人退热后或恢复期中，可发生眼血管膜炎、视网膜炎、脑膜炎、脑动脉炎等并发症或后发症，其发病机制与变态反应有关。


医学微生物学 第二十一章螺旋体 3.免疫性主要依赖于特异性体液免疫。发病后l~2周，机体可产生特异性抗体。特异性抗体有调理、凝集、溶解钩端螺旋体以及增强单核－巨噬细胞吞噬的作用，从而清除体内的钩端螺旋体。特异性抗体似乎对肾脏中的钩端螺旋体无明显作用，故部分钩端螺旋体病病人恢复期1~2周，尤其是感染动物尿中可长期甚至终身带菌并排菌，其机制未明。感染后机体可获得对同一血清型钩端螺旋体的持久免疫力，但不同血清群之间无明显的交叉保护作用。单核－巨噬细胞有较强的吞噬及杀灭钩端螺旋体的能力，中性粒细胞则否，但最近发现问号钩端螺旋体黄疽出血群赖株有一种FasL样表面脂蛋白，能与单核－巨噬细胞Fas结合后激活caspase-8/-3诱导细胞凋亡。 四、微生物学检查 1.标本采集病原学检查时，发病7~10天取外周血，两周后取尿液。有脑膜刺激症状者取脑脊液。血清学检查时，可采取单份血清，但最好采集发病1周及3~4周双份血清。


医学微生物学 四、微生物学检查 (2)分离培养与鉴定：将标本接种于Korthof或EMJH培养基中，28°C培养2周，用暗视野显微镜检查有无钩端螺旋体生长。培养阳性者进一步用PCR、显微镜凝集试验(MAT)和凝集吸收试验(AAT)进行基因种、血清群和血清型的鉴定。(3)动物试验：适用于有杂菌污染的标本。将标本接种千幼龄豚鼠或金地鼠腹腔，一周后取心血镜检并作分离培养及鉴定。若动物发病后死亡，解剖后可见皮下、肺部等处有出血点或出血斑，肝、脾、肾组织锁银染色后镜检可见大量钩端螺旋体。(4)分子生物学检测方法：常用PCR检测标本中钩端螺旋体16S rDNA基因片段，该法虽简便、快逮敏感，但不能获得菌株。限制性核酸内切酶指纹图谱可用于钩端螺旋体鉴定、分型、变异等研究，脉冲场凝胶电泳聚类分析可用千流行病学调查。


医学微生物学 3.血清学诊断以MAT最为经典和常用。 (1)MAT：用我国15群15型致病性钩端螺旋体参考标准株结合当地常见的血清群、型的活钩端螺旋体作为抗原，与不同稀释度的疑似钩端螺旋体病病人血清混合后37屯孵育l~2小时，在暗视野显微镜下检查有无凝集现象，若血清中存在同型抗体，可见钩端螺旋体被凝集成不规则的团块或蜘蛛状，以50％钩端螺旋体被凝集的最高血清稀释度作为效价判断终点。单份血清标本的MAT凝集效价1:400以上或双份血清标本凝集效价增长4倍及以上有诊断意义。本试验特异性和敏感性均较高，但通常不能早期诊断。(2)TR/patoc I属特异性抗原凝集试验：双曲钩端螺旋体Patoc I株经80°C加热10分钟后可作为属特异性抗原，能与所有感染不同血清群、型致病性钩端螺旋体的病人血清中IgM抗体发生凝集反应，常用的方法为玻片凝集试验(s l ide agglutination test, SAT)，用千早期诊断。


医学微生物学 3.血清学诊断以MAT最为经典和常用。 (3)间接凝集试验：将钩端螺旋体可溶性抗原吸附千乳胶或活性炭微粒等载体上，然后检测血清标本中有无相应凝集抗体。单份血清标本乳胶凝集效价＞l:2、炭粒凝集效价＞1:8判为阳性，双份血清标本凝集效价呈4倍及以上增长则更有诊断价值。O做好防鼠灭鼠工作，加强对带菌家畜的管理，保护水源。疫区入群接种钩端螺旋体多价疫苗是预防和控制钩端螺旋体病流行的主要措施。夏季和早秋是钩端螺旋体病流行季节，应尽量避免或减少与疫水接触接触疫水人群可口服多西环素进行紧急预防。钩端螺旋体疫苗有多价全菌死疫苗和多价外膜疫苗，前者虽有免疫保护作用，但副作用较大，后者由我国学者首创，其免疫效果好、不良反应小。治疗首选青霉素，至今尚未发现钩端螺旋体对青霉素有耐药性，青霉素过敏者可选用庆大霉素或多西环素。部分病人注射青霉素后出现寒战、高热和低血压，少数病人甚至出现抽搞、休克、呼吸和心跳暂停，称为赫氏反应。赫氏反应可能与钩端螺旋体被青霉素杀灭后所释放的大量毒性物质有关。


医学微生物学 第二节密螺旋体属 密螺旋体属(Treponema)螺旋体分为致病性和非致病性两大类。致病性密螺旋体主要有苍白密螺旋体(T.pallidum)和品他密螺旋体(T. carateum)两个种。苍白密螺旋体又分为3个亚种：苍白亚种(subsp. pallidum)地方亚种(subsp. endemicum)和极细亚种(subsp. pert,enue)，分别引起梅毒、非性传播梅毒（又称地方性梅毒）和雅司病。品他密螺旋体是品他病的病原体。


医学微生物学 —、苍白密螺旋体苍白亚种 苍白密螺旋体苍白亚种俗称挴毒螺旋体，是人类梅毒病原体。梅毒(syp h i li s)是对人类危害较大的性传播疾病(sex u al transmitted disease, STD)。（一）生物学性状1形态与染色长6~l5mm，宽约0.1-0.2mm,，有8~14个较为致密而规则的螺旋，两端尖直运动活泼。梅毒螺旋体基本结构由外至内分别为外膜、细胞壁、3~4根内鞭毛及细胞膜包绕的原生质体。内鞭毛能使梅毒螺旋体以移行、屈伸、滚动等方式运动。革兰染色阴性，但不易着色，用Fontana踱银染色法染成棕褐色（图21-2A/文末彩图21-2A)，常用暗视野显微镜直接观察悬滴标本中的梅毒螺旋体（图21-2B／文末彩图21-2B)。


医学微生物学 —、苍白密螺旋体苍白亚种 图21-2兔睾丸组织（A）及组织培养基中（B)的挴毒螺旋体A踱银染色（光学显微镜，x lOOO); B：悬滴标本（暗视野显微镜，X1000)2培养特性不能在无生命人工培养基上生长繁殖。Nichol s有毒株对人和家兔有致病性，接种家兔睾丸或眼前房能保待毒力且缓慢繁殖。若将N ichols株接种于含多种氨基酸的兔睾丸组织碎片中，虽能在厌氧条件下生长繁殖，但失去致病力，该菌株称为Re it e r株。N i c hol s株和Re it er株广泛用作多种梅毒血清学诊断方法的抗原。有文献报道，采用棉尾兔(cotton tail rabbit)单层上皮细胞在微需氧条件下(I.5%02、5%CO2、93.5%N2)33°C培养的梅毒螺旋体，可保持毒力并能生长繁殖。3.抗原构造主要有分子噩分别为15、17、34、44、47kD外膜蛋白，其中47kD外膜蛋白(TpN47)含益最高且抗原性较强，其次为T pN15和TpN17。鞭毛蛋白主要由33kD、33. SkD核心蛋白亚单位和37k0鞘膜蛋白亚单位组成，其中37kD鞘膜蛋白亚单位含量高且抗原性强。


医学微生物学 —、苍白密螺旋体苍白亚种 4基因组梅毒螺旋体N ich ols株染色体基因组为一个l138011bp的环状DNA。5抵抗力对温度和干燥特别敏感，抵抗力极弱。离体后干燥l~2小时或50°C加热5分钟即死亡。血液中的梅毒螺旋体4屯放置3天可死亡，故血库4屯冰箱储存3天以上的血液通常无传染梅毒的风险。对化学消毒剂敏感，1%～2％苯酚处理数分钟即死亡。对青霉素、四环素、红霉素较为敏感。（二）致病性和免疫性1致病物质梅毒螺旋体有很强侵袭力，但未发现有内毒素和外毒素。(I)荚膜样物质：为菌体表面的黏多糖和唾液酸，可阻止抗体等大分子物质与菌体结合、抑制补体激活以及补体溶菌作用、干扰单核－巨噬细胞吞噬，从而有利千梅毒螺旋体在宿主内存活和扩散。梅毒病人常出现的免疫抑制现象也被认为与荚膜样物质有关。(2)黏附因子：多种梅毒螺旋体外膜蛋白被证明具有黏附作用，其受体主要是靶细胞胞外基质(ECM)中的纤维连接蛋白(FN)和层粘连蛋白(LN)。


医学微生物学 —、苍白密螺旋体苍白亚种 (3)侵袭性酶类：透明质酸酶(hyaluronidas)和黏多糖酶(mucopolysaccharidase)能分解组织、ECM血管基底膜中的透明质酸(hyaluronic acid)和黏多糖(mucoitin/mucopolysaccharide)，有利千梅毒螺旋体的侵袭和扩散。病理性免疫反应参与了梅毒螺病人旋体致病过程，挴毒病人体内常出现多种自身抗体。2.所致疾病梅毒螺旋体仅感染人类引起梅毒，梅毒病入是唯一的传染源。梅毒一般分为后天性（获得性）和先天性两种，前者通过性接触传染，故又称为性病梅毒，后者从母体通过胎盘传染给胎儿。输入梅毒螺旋体污染的血液或血制品，可引起输血后梅毒。获得性梅毒临床上分三期，表现为发作、潜伏和再发作交替的现象。


医学微生物学 破坏性较小。 (3)皿期梅毒：又称晚期梅毒，二期梅毒发病后经2~7年、甚至10~30年潜伏期后，病人出现全身性梅毒损害，主要表现为结节性梅毒疹(nodular syphilid)和树胶肿(gumma)为特征的多种晚期皮肤和黏膜损害、全身组织和器官慢性炎性损伤、慢性肉芽肿及组织缺血性坏死、心血管梅毒和神经梅毒。结节性梅毒疹出现较早，常呈环状或蛇行状结节群，新旧损害此起彼伏，迁延多年。树胶肿出现较晚，质地硬如树胶，可逐渐增大，坏死后形成边界清晰、基底凹凸不平的肉红色溃疡，愈合缓慢。心血管梅毒病变多见于主动脉和心脏，引起单纯性主动脉炎、主动脉瘤、主动脉瓣闭锁不全、主动脉口狭窄，严重者可危及生命。神经梅毒分为无症状神经梅毒、脑膜血管梅毒和脑实质梅毒，无症状神经梅毒脑脊液检查异常但无神经系统症状和体征，脑膜血管梅毒可分为灶性脑膜炎、脑血管梅毒和脊髓脑膜血管梅毒，脑实质梅毒表现为脊髓捞、麻痹性痴呆和视神经萎缩。此期病灶内梅毒螺旋体数量很少，传染性小但破坏性大、病程长，疾病损害呈进展和消退交替出现。先天性梅毒是梅毒孕妇体内的梅毒螺旋体通过胎盘引起的胎儿全身感染，可导致流产、早产或死胎，新伉。


医学微生物学 破坏性较小。 生儿可有皮肤病变、马鞍鼻、锯齿形牙、间质性角膜炎、骨软骨炎、先天性耳聋等特殊体征，俗称梅毒儿。3免疫性梅毒的免疫为传染性免疫或有菌性免疫，即巳感染梅毒螺旋体的个体对梅毒螺旋体的再感染有抵抗力，若体内梅毒螺旋体被清除，免疫力也随之消失。梅毒螺旋体侵入宿主机体后，首先被单核－巨噬细胞和中性粒细胞吞噬，但不一定被杀死，只有在特异性抗体及补体协同下，吞噬细胞才能杀灭梅毒螺旋体。感染后机体可产生特异性细胞免疫和体液免疫，其中以迟发型超敏反应为主的细胞免疫抗梅毒螺旋体感染作用较大。在梅毒螺旋体感染的所有阶段，病人可产生梅毒螺旋体抗体和心磷脂抗体。梅毒螺旋体抗体可在补体存在的条件下，杀死或浴俯梅毒螺旋体，同时对吞噬细胞有免疫调理作用。心磷脂抗体又称反应素(reagi n)，能与生物组织中的某些脂类物质发生反应，无保护作用，但可用于梅毒血清学诊断。此外，梅毒病人体内常有多种自身抗体，如抗泪巴细胞抗体、类风湿因子、冷凝集素等，提示病人有自身免疫反应。


医学微生物学 二、其他密螺旋体 （一）苍白密螺旋体地方亚种地方性梧毒(e nd em i c syp hili s)或称非性病梅毒的病原体，通过污染的食具经黏膜传播。地方性梅毒流行千非洲西亚和中东地区，我国未见病例报道。临床主要表现为口咽部黏膜斑、口角开裂性丘疹扁平湿症、掌和足底皮肤过度角化和树胶肿损害，疾病晚期内脏并发症少见。青霉素治疗有效。 （二）苍臼螺旋体极细亚种 雅司病(yaws)的病原体，主要通过与病人病损皮肤直接接触而感染。雅司病流行于中非、南美、东南亚热带地区，温带地区偶见。20世纪40年代江苏北部曾有雅司病流行，20世纪60年代以来我国未发现此病。原发性损害主要是四肢杨梅状丘疹，皮损处常形成瘢痕，骨破坏性病变常见，内脏和神经系统的并发症少见。青霉素治疗有效。 （三）品他密螺旋体 品他病(pinta)的病原体，主要通过与病人病损皮肤的直接接触而感染。品他病流行于中美和南美地区，我国未见病例报道。原发性损害是皮肤出现播痒性小丘疹，遍及面、颈、胸、腹和四肢，继而扩大、融合表面脱屑，数月后呈扁平丘疹，色素加深。初次感染后1~3年，皮损处色素减退甚至消失呈白瓷色斑，皮肤结珈、变形。青霉素治疗有效。


医学微生物学 第三节疏螺旋体属 疏螺旋体属(Borrelia)螺旋体有3~10个不规则的螺旋。对人有致病性的主要有伯氏疏螺旋体(B. burgdorfe ri)和多种回归热螺旋体，分别引起莱姆病和回归热。奋森疏螺旋体是人口腔正常菌群，但可引起机会性口腔感染。 —、伯氏疏螺旋体 伯氏疏螺旋体(B. burgdorferi)是莱姆病(Lyme disease)的病原体。1977年，莱姆病发现千美国康涅狄格州的莱姆镇，5年后Burgdorfer等从鹿婢及病人体内分离出伯氏疏螺旋体，并证实该螺旋体为莱姆病的病原体。莱姆病以婢为媒介进行传播，人和多种动物均可感染。我国北方林区为莱姆病主要疫源地，目前已有20余个省和自治区证实有莱姆病存在。 （四）微生物学检查 1标本采集整个病程中伯氏疏螺旋体数量均较少，难以分离培养，主要取病人血清标本进行血清学检查。有时也可采集皮损、血液、脑脊液、关节液、尿液等标本用分子生物学方法检测。


医学微生物学 二、回归热螺旋体 回归热(relapsing fever)是一种以反复周期性急起急退高热为临床特征的急性传染病。多种疏螺旋体均可引起回归热。根据病原体及其媒介昆虫不同分为两类：心乱传回归热：又称流行性回归热，病原体为回归热疏螺旋体(B. recurrentis)，乱为传播媒介。＠婢传回归热：又称地方性回归热，病原体为杜通疏螺旋体(B. duttonii)和赫姆斯疏螺旋体(B. hermsii)，主要由软婢传播。婢传回归热临床表现与乱传回归热相似，但症状较轻，病程较短。我国主要流行乱传回归热。 （三）致病性和免疫性 1致病性回归热螺旋体感染后潜伏期3~10天，然后突发高热，持续3~5天退热，约一周后又出现高热，如此反复发作达3~10次。急起急退的反复周期性高热、全身肌肉酸痛、肝脾大为回归热的临床特征，重症病人可出现黄疽和出血。2免疫性感染后机体可产生特异性抗体，抗体在补体协同下可裂解回归热螺旋体。回归热螺旋体外膜蛋白极易发生变异，所形成的突变株可逃避抗体的攻击，繁殖到一定数量后引起第二次高热，如此反复多次，直至机体产生的多种特异性抗体能对各种变异株发挥作用时，回归热螺螺旋方被清除。感染后免疫力维持时间短暂。


医学微生物学 （三）致病性和免疫性 （四）微生物学检杳采集发热期的外周血标本，直接涂片后进行Giemsa染色，光学显微镜下可见比红细胞长数倍且有疏松螺旋的螺旋体，但退热期血液中常无螺旋体。（五）防治原则进入疫区人员应避免乱和蟀的叮咬。青霉素、红霉素、多西环素治疗有效。目前尚无疫苗产品。 三、奋森疏螺旋体 奋森疏螺旋体(B. vincentii)与梭形梭杆菌(Fusob ec t e r iurn fusifo rme)共同寄居于入口腔牙跟部位，当机体免疫功能下降时，奋森疏螺旋体与梭形梭杆菌大量繁殖，协同引起奋森咽峡炎(V i ncent angina)、牙跟炎、口腔坏疽等疾病。微生物学检查时可采取局部病变材料直接涂片，革兰染色镜检可见疏螺旋体和梭状杅菌。


医学微生物学 （严杰） 病毒(virus)是形态最微小，结构最简单的微生物。因体积微小，必须用电子显微镜放大几万至几十万倍后方可观察；结构简单表现为无细胞结构，仅有一种类型核酸(DNA或RNA)作为其遗传物质。为保护其核酸不被核酸酶等破坏，外围有蛋白衣壳，某些病毒在衣壳外还有包膜。病毒因缺少编码能量代谢或蛋白质合成所需元件（线粒体、核糖体）的遗传信息，只有在活细胞内方可显示其生命活性。与其他胞内专性寄生的微生物不同的是，病毒进入活细胞后，可根据病毒核酸的指令，改变细胞的一系列生命活动，复制出大量子代病毒，并导致细胞发生多种改变，而不是进行类似细菌等的二分裂繁殖。由于病毒无细胞结构、只有一种核酸为遗传物质、必须在活细胞内才能显示生命活性，故病毒被列为一个独立的微生物类型，即非细胞型微生物(acellul ar microorganism)。


医学微生物学 （严杰） 病毒在医学微生物中占有十分重要的地位。在微生物引起的疾病中，由病毒引起的疾病约占75%。常见的病毒性疾病有肝炎、流行性感冒、脑炎、腹泻和艾滋病等。病毒性疾病不仅传染性强、流行广，而且有效药物少。除急性感染外，有些病毒还可引起持续性感染，还与肿瘤和自身免疫病的发生密切相关。随着分子生物学和分子流行病学的发展，使入们对病毒与宿主的关系有了新的认识，其致病机制不断被揭示，病毒学已成为医学与生命科学研究的热门学科之一。


医学微生物学 第二十二章病毒的基本性状第一节病毒的大小与形态 一个完整成熟的病毒颗粒称为病毒体(virion)，是病毒在细胞外的典型结构形式，并有感染性。病毒体大小的测量单位为纳米或毫微米(nanom e ter, nm，为1/1000µ,m)。病毒体的大小差别悬殊，最大约为300nm，如疮病毒；最小的约为20nm，如细小DNA病毒。多数人和动物病毒呈球形或近似球形，少数为杆状、丝状、弹状和砖块状，噬菌体呈蜊蚂状。病毒体与其他微生物大小和形态的比较见图22-1。测量病毒体大小最可靠的方法是电子显微镜技术，也可用超速离心沉淀、分级超过滤和X线晶体衍射等技术来研究病毒的大小、形态、结构和亚单位等。病毒与其他微生物的比较参见表22-1。噬菌体DNA病毒RNA病毒噬菌体. MS2微小DNA病毒..微小RNA病毒乳多空病毒@@呼肠病毒=©冠状病毒肝炎病毒@正黏病毒。


医学微生物学 衣原体乡,.-...霆、．t在了··_，J 牡匕，i;.-.~4.＄忆如“r心'·｀坛，夕尔．穸K·特性病毒细菌支原体立克次体衣原体真菌结构非细胞原核细胞原核细胞原核细胞原核细胞真核细胞有无细胞壁++++核酸类型DNA或RNA DNA+RNA DNA+RNA DNA+RNA DNA+RNA DNA+RNA在人工培养基上生长+++细胞培养+一般不用一般不用++一般不用通过细菌滤器+++增殖方式复制二分裂二分裂二分裂二分裂有性或无性常用抗生素敏感性++++干扰素敏感性+第二节病毒的结构和化学组成(—)核衣壳病青体的基本结构是由核心(core)和衣壳(capsid)构成的核衣壳(nucleocapsid)。有些病毒的核衣壳外有包膜(envelope)和包膜的构成成分刺突(spike)（图22-2)。有包膜的病毒称为包膜病毒(enveloped v iru s)，无包膜的病毒体称裸露病毒(naked virus)。


医学微生物学 裸露病毒 仅见于瘦病毒和噬菌体等。经测定，用20面立体构成的外壳最为坚固，内部容积最大。螺旋对称型衣壳则相对不坚固，衣壳外需有包膜。（二）包膜包膜是包绕在病毒核衣壳外面的双层膜。某些病毒在成熟的过程中穿过宿主细胞，以出芽方式向宿主细胞外释放时获得的，含有宿主细胞膜或核膜成分，包括脂质、多糖和少许蛋白质。包膜表面常有不同形状的突起，称为包膜子粒(peplomere)或刺突(sp ike)。其化学成分为糖蛋白(gl ycoprotein, gp)，亦称刺突糖蛋白。流感病毒的刺突是由天门冬酰胺连接碳水化合物形成的糖蛋白组成（图22-3)。 （三）其他辅助结构 如腺病毒在20面体的各个顶角上有触须样纤维(an tennal fiber)，亦称纤维剌突或纤突，能凝集某些动物红细胞并损伤宿主心勺-C-心可筵mm了细胞。


医学微生物学 有包膜的病毒称为包膜病毒(enveloped皿n：二mmf v iru s)，无包膜的病毒称为裸露病毒(n aked v i rus)。人和动物病毒多数具有包膜。某些包膜病毒在核衣壳外层和包膜内层之间有基图22-3刺突结构示意图（流感病毒血凝素糖蛋质蛋白，其主要功能是把内部的核衣壳蛋白白三聚体）与包膜联系起来，此区域称为被膜。不同种病毒的被膜厚度不一致，也可作为病毒鉴定的参考。因此，病毒的大小、形态和结构在病毒分类和病毒感染诊断中具有重要价值。


医学微生物学 二、病毒的化学组成与功能(—)病毒核酸 病毒核酸的化学成分为DNA或RNA，以此分成DNA和RNA病毒两大类。核酸具有多样性，可为线型或环型，可为单链或双链，DNA病毒大多为双链，细小DNA病毒(parvov iru s)和环状病毒(c i rcovi ru s)除外；RNA病毒大多是单链，呼肠病毒(reovirus)和博纳病毒(bornavi rus)除外。单链RNA有正链与负链之分。双链DNA或RNA皆有正链与负链。有的病毒核酸分节段。病毒核酸大小差异悬殊，细小DNA病毒仅由5000个核甘酸组成，而最大的瘦类病毒则由约4000000个核甘酸组成。病毒核酸是主导病毒感染、增殖、遗传和变异的物质基础。其主要功能有：心指导病毒复制：病毒的增殖是以基因组为模板，经过转录、翻译过程合成病毒的前体形式，如子代核酸、结构蛋白，然后再装配释放成子代病毒体；＠决定病毒的特性：病毒核酸链上的基因密码记录着病毒全部信息，由它复制的子代病毒可保留亲代病毒的一切特性，故亦称为病毒的基因组(genome)；＠部分核酸具有感染性：除去衣壳的病毒核酸进入宿主细胞后，病毒单正链RNA(+ssRNA)基因组能够直接作为mRNA编码蛋白质，在易感细胞中可增殖形成子代病毒，故具有感染性，称为感染性核酸(infectio u s RNA)，如小RNA病毒基因组＋ssRNA。虽然逆转录病毒的基因组为单正链RNA，但因无mRNA翻译模板的活性，故其基因组不具感染性。但HI V基因组RNA可以作为模板逆转录cDNA。感染性核酸不受衣壳蛋白和宿主细胞表面受体的限制，易感细胞范围较广。但易被体液中核酸酶等因素破坏，因此感染性比完整的病毒体要低。


医学微生物学 二、病毒的化学组成与功能(—)病毒核酸 （二）病毒蛋白质蛋白质是病毒的主要组成部分，约占病毒体总重量的70%，由病毒基因组编码，具有病毒的特异性。病毒蛋白可分为结构蛋白和非结构蛋白。结构蛋白指的是组成病毒体的蛋白成分，主要分布千衣壳、包膜和基质中，具有良好的抗原性。包膜蛋白多突出于病毒体外，即刺突糖蛋白。能与宿主细胞表面受体结合的蛋白称为病毒吸附蛋白(viral attachment proteins, V AP), VAP与受体的相互作用决定了病毒感染的组织亲嗜性，如与红细胞结合的VAPs称为血疑素(hemagglutinins, HAs)（图22-3)。有些糖蛋白还是免疫保护作用的主要抗原。基质蛋白是连接衣壳蛋白和包膜蛋白的部分，多具有跨膜和铀定(anchor)的功能。病毒结构蛋白有以下几种功能：CD保护病毒核酸：衣壳蛋白包绕着核酸，避免了环境中的核酸酶和其他理化因素对核酸的破坏；＠参与感染过程：VAP能特异地吸附至易感细胞表面受体上，介导病毒核酸进入宿主细胞，引起感染；＠具有抗原性：衣壳蛋白是一种良好抗原，病毒进入机体后，能引起特异性体液免疫和细胞免疫。病毒的非结构蛋白是指由病毒基因组编码，但不作为结构蛋白参与病毒体的构成，包括病毒编码的酶类和特殊功能的蛋白，如蛋白水解酶、DNA聚合酶、逆转录酶、胸腺啼唗核昔激酶和抑制宿主细胞生物合成的蛋白等。病毒的非结构蛋白不一定存在于病毒体内，也可存在千感染细胞中。


医学微生物学 二、病毒的化学组成与功能(—)病毒核酸  （三）脂类和糖 病毒体的脂质主要存在于包膜中，有些病毒含少佩糖类，以糖蛋白形式存在，也是包膜的表面成分之一。包膜的主要功能是维护病毒体结构的完整性。包膜中所含磷脂、胆固醇及中性脂肪等能加固病毒体的结构。来自宿主细胞膜的病毒体包膜的脂类与细胞脂类成分同源，彼此易千亲和及融合，因此包膜也起到辅助病毒感染的作用。另外，包膜具有病毒种、型特异性，是病毒鉴定和分型的依据之一。包膜构成病毒体的表面抗原，与致病性和免疫性有密切关系。包膜对干、热、酸和脂溶剂敏感，乙酰能破坏病毒包膜，使其灭活而失去感染性，常用来鉴定病毒有无包膜。 第三节病毒的增殖 病毒缺乏增殖所需的酶系统，只能在有易感的活细胞内进行增殖。病毒增殖的方式是以其基因组为模板，在DNA聚合酶或RNA聚合酶以及其他必要因素作用下，经过复杂的生化合成过程，复制出病毒的子代基因组，病毒基因组则经过转录、翻译过程，合成大量的病毒结构蛋白，再经过装配，最终释放出子代病毒。这种以病毒核酸分子为模板进行复制的方式称为自我复制(self replication)。


医学微生物学 （一）病毒的复制周期 从病毒进入宿主细胞开始，经过基因组复制，到最后释放出子代病毒的过程，称为一个病毒复制周期(repli cation cycle)。感染性病毒颗粒从复制初期结构消失，即进入隐蔽期(eclipse period)，继而进入增殖期。病毒量逐渐增多的时间长短视病毒种类而异。人和动物病毒的复制周期依次包括吸附、穿入、脱壳、生物合成及装配与释放等5个阶段。


医学微生物学 （一）病毒的复制周期 1.吸附(adsorption)病毒吸附于宿主细胞表面是感染的第一步。吸附主要是通过病毒表面的吸附蛋白与易感细胞表面特异性受体相结合。不同细胞表面有不同受体，它决定了病毒的不同嗜组织性和感染宿主的范围，如无包膜小RNA病毒衣壳蛋白特定序列能与人及灵长类动物细胞表面脂蛋白受体结合，而腺病毒衣壳触须样纤维能与细胞表面特异性蛋白相结合。包膜病毒多通过表面糖蛋白结构与细胞受体结合，如流感病毒HA糖蛋白与细胞表面受体唾液酸结合发生吸附；人类免疫缺陷病毒(HIV)包膜糖蛋白gpl20的受体是人Th细胞表面CD4分子；EB病毒则能与B细胞CD21受体结合。VAP与受体是组织亲嗜性的主要决定因素，却并不是唯一的决定因素，如流感病毒受体存在于许多组织中，但病毒却不能感染所有的细胞类型。无包膜病毒通过衣壳蛋白或突起作为VAP吸附千受体。病毒不能吸附千无受体细胞，因而不能发生感染。细胞含受体数不尽相同，最敏感细胞可含10万个受体。吸附过程可在几分钟到几十分钟内完成。常见病毒的VAP与宿主细胞受体见表22-2。


医学微生物学 （一）病毒的复制周期 2.穿入(penetration)病毒吸附在宿主细胞膜后，主要是通过吞饮、融合、直接穿入等方式进入细胞心吞饮(endocytosis)，即病毒与细胞表面结合后内凹入细胞，细胞膜内陷形式类似吞噬泡，病毒整体 地 ：进入细胞质内。无包膜的病毒多以吞饮形式进入易感动物细胞内；＠融合(fusmn)，是指病，千l ot}毒包膜与细胞膜密切接触，在融合蛋白的作用下，病毒包膜与细胞膜融合，而将病毒的核衣壳释放至细胞质内。有包膜的病毒，如正黏病毒、副黏病毒、庖疹病毒等都以融合的形式穿入细胞。有的病毒体表面位点与细胞受体结合后，由细胞表面的酶类协助病毒脱壳，使病毒核酸直接进入宿主细胞内，如噬菌体。3脱壳(uncoating)病毒体必须脱去蛋白质衣壳后，核酸才能发挥作用。多数病毒在穿入细胞时已在细胞的溶酶体酶的作用下脱壳释放出核酸。少数病毒的脱壳过程较复杂。这些病毒往往是在脱壳前，病毒的酶巳在起转录mRNA的作用。


医学微生物学 地 4生物合成(biosynthesis)病毒基因组一旦从衣壳中释放后，就进入病毒复制的生物合成阶段，即病毒利用宿主细胞提供的低分子物质大量合成病毒核酸和蛋臼。用血清学方法和电镜检查宿主细胞，在生物合成阶段找不到病毒颗粒，故被称为隐蔽期。各种病毒该期的长短不一，如脊髓灰质炎病毒为3~4小时，披膜病毒5~7小时，正黏病毒7~8小时，副黏病群ll~l2小时，腺病毒l6~l7小时。在生物合成阶段，根据病毒基因组转录mRNA及翻译蛋白质的不同，病毒生物合成过程可归纳为7大类型：即双链DNA病毒、单链DNA病毒、单正链RNA病毒、单负链RNA病毒、双链RNA病毒、逆转录病毒和嗜肝DNA病毒。不同生物合成类型的病毒，其生物合成过程不同。(1)双链DNA病毒：人和动物DNA病毒多数是双链DNA(dsDNA)，例如庖疹病毒、腺病毒。它们在细胞核内合成DNA，在细胞质内合成病毒蛋白；只有痐病毒例外，因其本身携带DNA多聚酶，DNA和蛋白质都在细胞质内合成。


医学微生物学 地 双链DNA病毒首先利用细胞核内依赖DNA的RNA聚合酶，转录出早期mRNA，再在胞质内核糖体翻译成早期蛋白。这些早期蛋白是非结构蛋白，主要为合成病毒子代DNA所需要的DNA多聚酶及脱氧胸腺啥唗激酶。然后以子代DNA分子为模板，大量转录晚期mR NA，继而在胞质核糖体上翻译出病毒的晚期蛋白即结构蛋白，主要为衣壳蛋白。其实，病寄在合成衣壳蛋白时，首先合成一个大的蛋白，再由蛋白酶将其降解为若干个小的衣壳蛋白，为以后的组装做好准备。如果没有蛋白酶作用，或者由千蛋白酶抑制剂的作用灭活了蛋白酶，不能形成衣壳蛋白，则病毒无法完成组装。dsDNA通过半保留复制形式，大量生成与亲代结构完全相同的子代DNA（图22-4)。 d,DNA亲4/－三二三于DN}复制』mRNA-（厂愿尽乌子代DNA 中正链RNA起mRNA作用翻译晚期蛋白（病毒衣壳蛋白及其他结构蛋白），负链RNA起模板作用，转录与负链RNA互补的子代病毒RNA（图22-5)。+ssRNA:+ssRNA~-ssRNA竺➔+ssRNA-－>装配~子代病毒


医学微生物学 三贪＄雷霖~(R声/ 5装配与释放(assembly maturation and release)病毒核酸与蛋白质合成之后，根据病毒的种类不同，在细胞内装配的部位和方式亦不同。除疮病毒外，DNA病毒均在细胞核内组装；大多数RNA病毒则在细胞质内组装。装配一般要经过核酸浓聚、壳粒集聚及包裹装灌核酸等步骤。包膜病寄还需在核衣壳外加一层包膜。包膜中的蛋白质是由病毒基因编码合成的，脂质及糖类都来自宿主细胞的细胞膜，个别病毒如疤疹病毒则来自细胞核膜。在装配完成后，裸露病毒随宿主细胞破裂而释放病毒，而有包膜的DNA病毒和RNA病毒则以出芽方式释放到细胞外，宿主细胞通常不死亡。包膜蛋白质向胞质移动过程中经糖基转移酶与糖结合成为糖蛋白，与脂类结合成为脂蛋白。有些病毒如巨细胞病毒，很少释放到细胞外，而是通过细胞间桥或细胞融合在细胞之间传播，致癌病毒的基因组则可与宿主细胞染色体整合，随细胞分裂而出现在子代细胞中。


医学微生物学 三贪＄雷霖~(R声/ 病毒复制周期的长短与病毒种类有关，如小RNA核糖核酸病毒为6~8小时，正黏病毒为15~30小时。每个细胞产生子代病毒的数佩也因病毒和宿主细胞不同而异，多者可产生JO万个病毒。'0（二）病毒的异常增殖与干扰现象1病毒的异常增殖病毒在宿主细胞内复制时，并非所有的病毒成分都能组装成完整的病毒体，常有异常增殖。2干扰现象(interference)两种病毒感染同一细胞时，可发生一种病毒抑制另一种病毒增殖的现象，称为干扰现象。干扰现象不仅发生在异种病毒之间，也可发生在同种、同型病毒之间。如流感病毒的自身于扰。在同一病毒株中混有缺陷病毒，当与完整病毒同时感染同一细胞时，完整病毒的增殖受到抑制的现象叫自身干扰现象，发挥干扰作用的缺陷病毒称为缺陷干扰颗粒(defective interfering pm让cle,DIP)。干扰现象不仅在活病毒间发生，灭活病毒也能干扰活病毒。病毒之间的干扰现象能够阻止发病，也可以使感染终止，使宿主康复。发生干扰的原因可能是因为病毒诱导宿主细胞产生了干扰素，也可能是病毒的吸附受到干扰或改变了宿主细胞代谢途径，阻止了另一种病毒的吸附和穿入等过程。


医学微生物学 第四节病毒的遗传与变异 病毒的基因组较简单，基因数多为3~10个，有些病毒增殖速度极快，是较早用千遗传学研究的工具。病毒遗传与变异机制的明晰对于阐明某些病毒性疾病的发病机制、病毒疫苗的制备以及病毒性疾病的防治具有重要意义。由于病毒的基因组很小，为充分利用其核酸，病毒基因组中的多种基因常以互相重叠的形式存在，即基因中的编码序列外显子(exon)之间有重叠。病毒基因的转录与翻译均需在细胞内进行，其基因组结构必须具有真核细胞基因组结构的特点，如含有内含子(intron)序列，具有转录后的剪切和后加工过程等。 一、基因突变 病毒在增殖过程中常发生基因组中碱基序列的置换、缺失或插入，引起基因突变，其自发突变率为10-8~10气用物理因素（如紫外线或丫射线）或化学因素（如亚硝基肌，5-氮尿瞪唗或5斗臭脱氧尿昔）处理病毒时，也可诱发突变，提高突变率。由基因突变产生的病毒表型性状改变的毒株称为突变株(mutan t)，突变株可呈多种表型，如病毒空斑或痉斑的大小、病毒颗粒形态、抗原性、宿主范围、营养要求、细胞病变以及致病性的改变等。常见的并有实际意义的突变株有以下几种。


医学微生物学 一、基因突变 1条件致死性突变株(conditionallethal mutant)只能在某种条件下增殖，而在另一种条件下则不能增殖的病毒株，如温度敏感性突变株(temperaturesensitive mutant, t s)在28~35'C条件下可增殖（称容许性温度），而在37~40屯条件下不能增殖（称非容许性温度）。t s株可来源于基因任何部位的改变，产生各种各样的ts突变株，典型ts株的基因所编码的酶蛋白或结构蛋白质，在较高温度下(36-41屯）失去功能，故病毒不能增殖。ts突变株常伴有毒力减低而保持其免疫原性的特点，是生产减毒活疫苗的理想株，但ts株容易出现回复突变（回复率为10-4)，因此在制备疫苗株时，必须经多次诱变后，才可获得在一定宿主细胞内稳定传代的突变株，亦称变异株(vari ant)。脊髓灰质炎减毒活疫苗就是这种稳定性ts变异株。


医学微生物学 一、基因突变 4耐药突变株(dru'g-resistant mutant)临床上应用针对病毒酶的药物后，有时病毒经短暂被抑制后又重新复制，常因编码病毒酶基因的改变而降低了病毒酶对药物的亲和力或作用，从而使病毒对药物产生抗药性而能继续增殖。从研究角度也可分析病毒酶的基因编码区，以发现碱基序列的变异与耐药性发生的关系。


医学微生物学 二、基因重组与重配 当两种或两种以上病毒感染同一宿主细胞时，它们之间可发生多种形式的相互作用，如干扰现象、共同感染、基因转移与互换、基因产物的相互作用等，但常发生千有近缘关系的病毒或宿主敏感性相似的病毒间。两种病毒感染同一宿主细胞发生基因的交换，产生具有两个亲代特征的子代病毒，并能继续增殖，该变化称为基因重组(gene recombination)，其子代病毒称为重组体(recombinants)。基因重组不仅能发生于两种活病毒之间，也可发生于一活病毒与另一灭活病毒之间，甚至发生千两种灭活病毒之间。对于基因分节段的RNA病毒，如流感病毒、轮状病毒等，通过交换RNA节段而进行基因重组的被称为重配(reassortment)；一般而言，发生重配概率可高千不分节段的病毒。已灭活的病毒在基因重组中可成为具有感染性的病毒，如经紫外线灭活的病毒与另一近缘的活病毒感染同一宿主细胞时，经基因重组而使灭活病毒复活，称为交叉复活(crossing reactivation)；当两种或两种以上的近缘的灭活病毒（病毒基因组的不同部位受损）感染同一细胞时，经过基因重组而出现感染性的子代病毒，称为多重复活(multipli c it y reactivation)。


医学微生物学 二、基因重组与重配  三、基因整合 指病毒基因组与宿主细胞基因组的整合。在病毒感染宿主细胞的过程中，有时病毒基因组中DNA片段可插入到宿主染色体DNA中，这种病毒基因组与细胞基因组的重组过程称为基因整合(gene inte护ation)。转导性噬菌体可引起宿主菌基因的普遍转导和局限性转导，溶原性噬菌体可使宿主菌变为溶原状态，这已在细菌遗传学中介绍。多种DNA病毒、逆转录病毒等均有整合宿主细胞染色体的特性，整合既可引起病毒基因的变异，也可引起宿主细胞染色体基因的改变（如出现V-On c),导致细胞转化发生肿瘤等。 四、病毒基因产物的相互作用 当两种病毒感染同一细胞时，除可发生基因重组外，也可发生病毒基因产物的相互作用，包括互补表型混合与核壳转移等，产生子代病毒的表型变异。


医学微生物学 四、病毒基因产物的相互作用 1互补作用和加强作用互补作用(complemen tat ion)是指两种病毒感染同一细胞时，其中一种病毒的基因产物（如结构蛋白和代谢酶等）促使另一病毒增殖。这种现象可发生于感染性病毒与缺陷病寄或灭活病毒之间，甚至发生于两种缺陷病毒之间的基因产物互补，而产生两种感染性子代病毒。其原因并非是缺陷病毒之间的基因重组，而是两种病毒能相互提供另一缺陷病毒所需的基因产物，例如病毒的衣壳或代谢酶等。


医学微生物学 四、病毒基因产物的相互作用 2表型混合与核壳转移病毒增殖过程中，核酸复制与转录，病毒蛋白质的翻译是分别在细胞的不同部位进行，因此有时两株病毒共同感染同一细胞时，一种病毒复制的核酸被另一病毒所编码的蛋白质衣壳或包膜包裹，也会发生诸如耐药性或细胞嗜性等生物学特征的改变，这种改变不是遗传物质的交换，而是基因产物的交换，称表型混合(p h eno t ypic mix i ng)。表型混合获得的新性状不稳定，经细胞传代后又可恢复为亲代表型。无包膜病毒发生的表型混合称核壳转移(transcapsidation)，如脊髓灰质炎病毒与柯萨奇病毒感染同一细胞时，常发生核壳转移，甚至有两亲代编码的壳粒相互混合组成的衣壳。因此在获得新表型病毒株时，应通过传代来确定病毒新性状的稳定性，以区分是基因重组体还是表型混合。 第五节理化因素对病毒的影响 病毒受理化因素作用后，失去感染性称为灭活(inactivation)。灭活的病毒仍能保留其他特性，如抗原性、红细胞吸附血凝及细胞融合等。 —、物理因素二、化学因素 病毒对化学因素的抵抗力一般较细菌强，可能是由千病毒缺乏酶类的原因。


医学微生物学 —、物理因素二、化学因素 1.脂溶剂病毒的包膜含脂质成分，易被乙酰、三氯甲烧、去氧胆酸盐等脂溶剂溶解。因此，包膜病毒进入人体消化道后，即被胆汁破坏。在脂溶剂中，乙酪对病毒包膜破坏作用最大，所以乙酰灭活试验可鉴别有包膜和无包膜病毒。 2酚类酚及其衍生物为蛋白变性剂，故可作为病毒的消毒剂。 3盐类有稳定病毒抵抗热灭活的作用，可用于疫苗制备等技术中。MgCl2、MgS04、Na2S04等盐类对小RNA病毒科、疮疹病毒科和正黏病毒科等病毒有稳定作用。如脊髓灰质炎疫苗必须冷冻保存，但通过添加盐类，病毒活性可以在室温下保持数周。4.氧化剂、卤素及其化合物病毒对这些化学物质都很敏感。5抗生素与中草药现有的抗生素对病毒无抑制作用，但可以抑制待检标本中的细菌，有利千分离病毒。近年来研究证明，有些中草药如板蓝根、大青叶、大黄、黄苠和七叶一枝花等对某些病毒有一定的抑制作用。


医学微生物学 第六节病毒的分类 病毒分类的研究历史较短，一般采用一种非系统的、多原则的、分等级的分类法。国际病毒分类委员会(int e rnational commillee on taxono my of viruses, ICTV)2017年公布的病毒分类命名最新报告中将病毒分为122个科，35个亚科，735个属。随着病毒学研究的不断深入，尤其是病毒基因和基因组测序研究的推进，使病毒分类从单一基因水平发展到了全基因组水平。病毒分类的依据有：心核酸的类型与结构(DNA或RNA、单链或双链、分子量、基因数和全基因组信息）；＠病毒体的形状和大小；＠衣壳对称性和壳粒数目；＠有无包膜；＠对理化因素的敏感性；＠抗原性；＠生物学特性（繁殖方式、宿主范围、传播途径和致病性）（表22-3，表22-4)。


医学微生物学 病毒科名癌病毒科疤疹病毒科腺病寄科嗜肝病毒科乳头瘤病毒科小DNA病毒科病毒科名副黏病毒科正黏病毒科逆转录病寄科小RNA病毒科冠状病毒科沙粒病毒科弹状病毒科丝状病毒科分类的主要特点dsDNA，有包膜dsDNA，有包膜dsDNA，无包膜dsDNA，复制过程有逆转录dsDNA，环状，无包膜+ssDNA无包膜


医学微生物学 病毒科名癌病毒科疤疹病毒科腺病寄科嗜肝病毒科乳头瘤病毒科小DNA病毒科病毒科名副黏病毒科正黏病毒科逆转录病寄科小RNA病毒科冠状病毒科沙粒病毒科弹状病毒科丝状病毒科分类的主要特点dsDNA，有包膜dsDNA，有包膜dsDNA，无包膜dsDNA，复制过程有逆转录dsDNA，环状，无包膜+ssDNA无包膜 主要成员天花病毒，痉苗病毒，猴疽病毒，传染性软抚病毒单纯庖疹病毒I型和II型，水疮－带状疤疹病毒，EB病毒，巨细胞病毒，人疤疹病毒6、7、8型腺病毒乳头瘤病毒细小Bl9病毒，腺病毒伴随病毒分类的主要特点-ssRNA，不分节，有包膜两条相同的＋ssRNA,不分节有包膜+ssRNA，不分节，无包膜主要成员副流感病群，｛山台病毒，麻疹病毒，腮腺炎病毒，呼吸道合胞病商，偏肺病毒流感病毒甲(A)，乙(B)，丙(C)型人类免疫缺陷病毒，人类嗜T细胞病毒脊髓灰质炎病群，埃可病毒，柯萨奇病毒冠状病毒拉沙热病毒，塔卡里伯病毒群（鸠宁和马秋波病毒），淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒狂犬病病毒，水疮口炎病毒埃博拉病毒，马堡病毒亚病毒(su bvirus)自然界中还存在一类比病毒还小、结构更简单的微生物，称为亚病毒。包括类病毒、卫星病毒和朊粒，是一些非寻常病毒的致病因子。1类病毒(viroi d)为植物病毒，是1971年美国D i e n er等长期研究马铃薯纺锤形块茎后报道命名的，迄今已发现有12种植物病由类病毒引起。类病毒仅由约360个核旮酸组成，为单链杆状RNA，有二级结构，无包膜或衣壳，不含蛋白质。在细胞核内增殖，利用宿主细胞的RNA聚合酶lI进行复制。对核酸酶敏感，对热、有机溶剂有抵抗力。致病机制可能是由千RNA分子直接干扰宿主细胞的核酸代谢。类病毒与人类疾病的关系尚不清楚。2.卫星病毒(satellite virus)是在研究类病毒过程中发现的又一种与植物病害有关的致病因子。卫星病毒可分为两大类，一类可编码自身的衣壳蛋白，另一类为卫星病毒RNA分子，曾称为拟病毒(v irusoid)，需利用辅助病毒的蛋白衣壳。其特点为由500~2000个核甘酸构成的单链RNA，与缺陷病毒不同，表现为与辅助病毒基因组间无同源性；复制时常干扰辅助病毒的增殖。有人认为人类的丁型肝炎病毒具有部分卫星病毒和类病毒的特征，是一种特殊的嵌合RNA分子。3.朊粒(prion)近年研究认为将朊粒列入病毒范畴不适宜，其生物学地位尚未确定。但目前国际病毒分类委员会仍把prion列为亚病毒，具体内容详见朊粒章节。（李凡） 第二十三章病毒的感染与免疫第一节病毒的致病作用 病毒的感染是从病毒侵入宿主开始，其致病作用则主要是通过侵入易感细胞、损伤或改变细胞的功能而引发。病毒感染的结局取决于宿主、病毒和其他影响机体免疫应答的因素。宿主因素包括：遗传背景、免疫状态、年龄以及个体的一般健康状况。病毒因素包括：病毒株、病毒感染量和感染途径等病毒毒力相关因素。因此，不同个体感染同一病毒体，其感染及抗感染结局可各异。 —、病毒感染的传播方式 病毒主要通过破损的皮肤、黏膜（眼、呼吸道、消化道或泌尿生殖道）传播，但在特定条件下可直接进入血循环（如输血、机械损伤、昆虫叮咬等）感染机体。反之，皮肤黏膜也是机体最好的防御屏障，泪液、黏液、纤毛上皮、胃酸、胆汁等均具有保护作用。病毒可以经一种途径进入宿主机体，也可经多途径感染机体，例如人类免疫缺陷病毒(HIV)。病毒感染的传播方式有水平传播(horizontal transmission)和垂直传播(vertical infe c tion)两种。水平传播是指病毒在人群不同个体之间的传播，包括人－人和动物－人之间（包括通过媒介）的传播，为大多数病毒的传播方式。垂直传播是指病毒由亲代宿主传给子代的传播方式，人类主要通过胎盘或产道传播，也可见其他方式，例如围产期哺乳和密切接触感染等方式。主要是孕产妇发生病毒血症，或病毒与血细胞紧密结合造成子代的感染，但人类尚未证实病毒基因可经生殖细胞传给后代。多种病毒可经垂直传播引起子代病毒感染，如风疹病毒、巨细胞病毒、HIV、HBV及HCV等（表23-1)。此外，围产期（孕28周～产后4周）病毒通过胎盘屏障、产道或产后哺乳及密切接触等形式由母亲传给胎儿或新生儿导致其感染甚至致病，此为围产期感染(perina tal infection)。围产期感染不易区分是发生在出生前、生产过程中或出生后，一般认为归属于垂直传播的范畴。垂直传播方式产生的感染称垂直感染，垂直感染可致死主要感染途径传播方式及途径病毒种类呼吸道空气、飞沫或皮屑流感病毒、鼻病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、腺病毒及部分E B病哥与肠道病毒、水癌病毒等消化道污染水或食品脊髓灰质炎病毒等肠道病毒、轮状病毒、甲肝病毒、血液注射、输血或血液制品、器官移HIV、1-IBV、HCV、风疹病毒、HCMV等眼或泌尿生殖道接触、游泳池、性交HIV、单纯疤疹病毒l、2型、肠道病毒70型、腺病毒、经胎盘、围产期宫内、分挽产道、哺乳等HBV、HIV、CMV、风疹病毒等破损皮肤昆虫叮咬、狂犬咬伤、鼠类咬伤乙型脑炎病毒、克里米亚－刚果出血热病毒、狂犬病胎、流产、早产或先天畸形，子代也可没有任何症状或成为病毒携带者。


医学微生物学 —、病毒感染的传播方式 病毒在机体内呈不同程度的播散，有些病毒只在入侵部位感染局部组织细胞，称局部感染(l ocal呻ction)或表面感染(superfi c ial infec tion)；另一些病毒可在入侵局部增殖经血流、淋巴液或神经系统向全身或远离入侵部位的器官播散，称为全身感染(sys tem ic infect ion)。病毒进入血液称为病毒血症(v i remia)。


医学微生物学 二、病毒感染的致病机制(—)病毒对宿主细胞的致病作用 1.杀细胞效应(cytoc idal effect)病毒在宿主细胞内复制完毕，可在很短时间内一次释放大矗子代病毒，细胞被裂解而死亡，称为杀细胞性感染(cylocidal infection)。主要见于无包膜、杀伤性强的病毒，如脊髓灰质炎病寄、腺病毒等。其机制是病毒在增殖过程中，阻断细胞核酸与蛋白质的合成，使细胞新陈代谢功能紊乱，造成细胞病变与死亡。如某些病毒的衣壳蛋白直接杀伤宿主细胞的作用。在病毒的大量复制过程中，细胞核、细胞膜、内质网、线粒体均可被损伤，导致细胞裂解死亡。在体外实验中，通过细胞培养和接种杀细胞性病毒，经一定时间后，可用显微镜观察到细胞变圆、坏死，从瓶壁脱落等现象，称为致细胞病变作用(cytopat hi c effect, CPE)。病毒的杀细胞效应发生在重要器官，如中枢神经系统，当达到一定程度可引起严重后果，甚至危及生命或造成严重后遗症。


医学微生物学 二、病毒感染的致病机制(—)病毒对宿主细胞的致病作用 2稳定状态感染(steady state infection)某些病毒进入细胞后能够复制，却不引起细胞立即裂解、死亡，这常常见千包膜病毒感染，如流感病毒、j苞疹病毒、某些披膜病毒等。病毒以出芽方式释放子代，其过程缓慢，一般不引起细胞立即溶解死亡。这些不具有杀细胞效应的病毒所引起的感染称为稳定性感染。但感染可引起宿主细胞融合及细胞表面产生新抗原。而且，稳定感染的细胞由于表达了病毒抗原，成为细胞免疫攻击的靶细胞，最终导致感染细胞的死亡。(1)细胞融合：某些病毒的酶类或感染细胞释放的溶酶体酶，能使感染细胞膜改变，导致感染细胞与邻近的细胞融合。病毒借助千细胞融合，扩散到未受感染的细胞。细胞融合是包膜病毒扩散的方式之一。细胞融合的结果是形成多核巨细胞或合胞体，如麻疹病毒在体内形成华新(Warthin)多核巨细胞。


医学微生物学 二、病毒感染的致病机制(—)病毒对宿主细胞的致病作用 (2)细胞表面出现病毒基因编码的抗原：病毒感染的细胞膜上常出现由病毒基因编码的新抗原。如流感病毒、副黏病毒在细胞内装配成熟后，以出芽方式释放时，细胞表面形成血凝素，因而能吸附某些动物的红细胞。病毒导致细胞癌变后，因病毒核酸整合到细胞染色体上，细胞表面也表达病毒特异性新抗原，使宿主细胞成为靶细胞，最终受细胞免疫作用而死亡。此外，还有因感染病毒引起细胞表面抗原决定簇的变化，暴露了在正常情况下隐蔽的抗原决定簇。


医学微生物学 二、病毒感染的致病机制(—)病毒对宿主细胞的致病作用 3.包涵体形成某些受病毒感染的细胞内，用普通光学显微镜可看到有与正常细胞结构差异和着色不同的圆形或椭圆形斑块，称为包涵体(inclusion bod y)。有的位千胞质内（疲病毒），有的位于胞核中（疤疹病毒），或两者都有（麻疹病毒）；包涵体有嗜酸性的或嗜碱性的，因病毒种类而异。其本质是心有些病毒的包涵体就是病毒颗粒的聚集体；＠有些是病毒增殖留下的痕迹；＠或病毒感染引起的细胞反应物。因包涵体与病毒的增殖、存在有关，且病毒包涵体各自具有一定的特征，故可作为病毒感染的诊断依据。如从可疑狂犬病的脑组织切片或涂片中发现细胞内有嗜酸性包涵体，即内基小体(Negri body)，可诊断为狂犬病。4细胞凋亡(apoptosis)病毒感染可导致宿主细胞发生凋亡，这一过程可能促进细胞中病毒释放，限制细胞生产的病毒体的数揽。但有些病毒感染则可抑制宿主细胞的早期凋亡，提高细胞产生子代病毒体的数掀。


医学微生物学 二、病毒感染的致病机制(—)病毒对宿主细胞的致病作用 5.基因整合与细胞转化某些DN A病毒和逆转录病毒在感染中可将基因整合于宿主细胞基因组中。一种是逆转录RNA病毒先以RNA为模板逆转录合成cDNA，再以cDNA为模板合成双链DNA，此双链DNA全部整合于细胞染色体DNA中；另一种是DNA病毒在复制中，可将部分DNA片段随机整合千细胞染色体DNA中。两种整合方式均可导致细胞转化，增殖变快，失去细胞间接触抑制，细胞转化也可由病毒蛋白诱导发生。基因整合或其他机制引起的细胞转化与肿瘤形成密切相关。 （二）病毒感染的免疫病理作用 病毒在感染损伤宿主的过程中，通过与免疫系统相互作用，诱发免疫应答损伤机体是重要的致病机制之一。目前虽有不少病毒的致病作用及发病机制尚不明确，但通过免疫应答所致的损伤在病毒感染性疾病中的作用越发显得重要，尤其是持续性病毒感染及与病毒感染有关的自身免疫性疾病。免疫病理损伤机制包括特异性体液免疫和特异性细胞免疫e一种病毒感染可能诱发一种发病机制，也可能两种机制并存。有些还可能存在对非特异性免疫机制造成损伤。


医学微生物学 （二）病毒感染的免疫病理作用 1抗体介导的免疫病理作用病毒的包膜蛋白、衣壳蛋白均为良好的抗原，能刺激机体产生相应抗体，抗体与抗原结合可阻止病毒扩散导致病毒被清除。然而感染后许多病毒抗原可出现千宿主细胞表面，与抗体结合后，激活补体，导致宿主细胞破坏，属1I型超敏反应。抗体介导损伤的另一机制是抗原抗体复合物引起的皿型超敏反应。病毒抗原与抗体形成的复合物可经常出现于血液循环中，若沉积在任何部位均可导致损伤。慢性病毒性肝炎病人常出现关节症状，与免疫复合物沉积千关节滑膜引起关节炎有关。若发生在肺部，引起细支气管炎和肺炎，如婴儿呼吸道合胞病毒感染。登革病毒的复合物可沉积千血管壁，激活补体使血管通透性增高，引起出血和休克。2.细胞介导的免疫病理作用特异性细胞免疫是宿主清除胞内病毒的重要机制。细胞毒性T细胞(CTL)对靶细胞膜病毒抗原识别后引起的杀伤，能终止细胞内病毒复制，对感染的恢复起关键作用。但细胞免疫也损伤宿主细胞，造成宿主细胞功能紊乱，这可能是病毒致病机制中的一个重要方面属W型超敏反应。


医学微生物学 （二）病毒感染的免疫病理作用 另外，通过对DNA病毒和RNA的病毒蛋白基因序列分析，发现有些病毒蛋白与宿主蛋白存在共同抗原决定簇。慢性病毒性肝炎、麻疹病毒和腮腺炎病毒感染后脑炎等疾病的发病机制可能与针对自身抗原的细胞免疫有关。3.致炎性细胞因子的病理作用INF--y、TNF-a、IL-I等细胞因子的大最产生将导致代谢紊乱，并活化血管活化因子，引起休克，弥散性血管内凝血(DIC)，恶病质等严重病理过程，甚至危及生命。4免疫抑制作用某些病毒感染可抑制免疫功能，其作用机制是病毒可主动抑制宿主的免疫应答。如下调机体干扰素诱生表达和（或）干扰索受体水平等，或通过编码微小RNA等机制，从而抑制机体固有免疫，如甲型流感病毒、肠道病毒、轮状病毒、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒等；也可导致高亲和力T细胞的清除，诱导部分免疫耐受；破坏抗原提呈细胞；抑制效应细胞等，从而降低机体适应性免疫的功能等，如麻疹病毒、风疹病毒、巨细胞病毒及HIV等。病毒感染所致的免疫抑制可激活体内潜伏的病毒或促进某些肿瘤的生长，使疾病复杂化，亦可能成为病毒持续性感染的原因之一。


医学微生物学 （三）病毒的免疫逃逸 病毒性疾病除与病毒的直接作用及引起免疫病理损伤有关外，也与病碍的免疫逃逸(viral mechani•sms of escape of immune responses)能力相关。病毒可能通过逃避免疫防御、防止免疫激活或阻止免疫应答的发生等方式来逃脱免疫应答。有些病毒通过编码抑制免疫应答的蛋臼质实现免疫逃逸；有些病毒形成合胞体让病毒在细胞间传播逃避抗体作用；有些病毒通过编码微小RNA靶向调节免疫应答蛋白，抑制宿主的固有免疫。常见病毒的免疫逃逸机制见表23-2。


医学微生物学 三、病毒感染的类型 根据有无临床症状，病毒感染可分为隐性感染和显性感染；根据病毒在机体内感染的过程及滞留的时间，病毒感染可分为急性感染和持续性感染。持续性感染又可分为潜伏感染、慢性感染、慢发病毒感染。（一）隐性感染和显性感染1.隐性病毒感染(inapparent viral infection)病毒进入机体不引起临床症状的感染，称隐性感染或亚临床感染(subclinical viral i nfection)，这可能与病毒毒力弱或机体防御能力强、病毒在体内不能大量增殖，因而对组织细胞的损伤不明显有关；也可能与病毒种类和性质有关，病毒侵犯后不能到达靶细胞，故不表现出临床症状。病毒隐性感染者虽不出现临床症状，但仍可获得免疫力而终止感染。部分病毒隐性感染者不能产生有效的免疫力，病毒可在体内增殖不被清除，并可长期向外界播散，这种隐性感染者称为病毒携带者(v iral carrier)。病毒携带者为重要的传染源，在流行病学上具有十分重要的意义。


医学微生物学 三、病毒感染的类型 2显性病毒感染(apparent viral infection)病毒感染后出现临床症状和体征，称为显性感染或临床感染(clinical i nfection)。有些病毒可造成多数感染者发病，如天花病毒、麻疹病毒；也有些病毒感染后只有极少数人发病，大多数感染者呈隐性感染，如脊髓灰质炎病毒、流行性乙型脑炎病毒。这是由机体抵抗力、入侵病毒的毒力和数量所决定的。 （二）急性病毒感染 急性病毒感染(ac u te viral i nfection)也称为病原消灭型感染，病毒侵入机体后，在细胞内增殖，经数日乃至数周的潜伏期后发病，如甲型流感病毒等。在潜伏期内病毒增殖到一定水平，导致靶细胞损伤和死亡而造成组织器官损伤和功能障碍，出现临床症状。但从潜伏期起，宿主即动员固有免疫和适应性免疫机制清除病毒。除死亡病例外，宿主一般能在出现症状后的一段时间内，将病毒清除掉而进入恢复期。其特点为潜伏期短，发病急，病程数日至数周，病后常获得特异性免疫。因此，特异性抗体可作为受过感染的证据。


医学微生物学 （三）持续性病毒感染 病毒可在机体待续存在数月至数年，甚至数十年。可出现症状，也可不出现症状而长期携带病毒，成为重要的传染源，如HIV、HBV等。形成持续性病毒感染(persistent viral infec t ion)有病毒和机体两方面的因素：心机体免疫功能弱，无力完全清除病毒，使得病毒在体内可长期存留；＠病毒存在千受保护的部位，可逃避宿主的免疫作用；＠某些病毒的抗原性太弱，机体难以产生免疫应答将其清除；＠有些病毒在感染过程中产生缺损性千扰颗粒，干扰病毒增殖，因而改变了病毒感染过程，形成持续@“',性感染；＠病毒基因整合在宿主细胞的基因组中，长期与宿主细胞共存。 持续性感染有下述3种类型： 3.慢发病毒感染(slow virus infection)指显性或隐性感染后，病毒有很长的潜伏期，可达数月，数年甚至数十年。在症状出现后呈进行性加重，最终导致死亡。为慢性发展进行性加重的病毒感染，较为少见但后果严重。如HIV引起的艾滋病、麻疹病毒引起的亚急性硬化性全脑炎(subacute sclerosi ng panencep halitis, SSPE)及朊粒感染引起的疾病等。


医学微生物学 四、病毒与肿瘤 大量的研究表明，病毒是人类肿瘤的致病因素之一，全世界至少有15%-20％的入类肿瘤与病毒感染有关，尤其是宫颈癌和肝癌。表23-3列出了与人类癌症密切相关的病毒。它们包括人乳头瘤病毒(HPV),EB病毒(EBV)，入类疤疹病毒8型，乙型肝炎病毒，丙型肝炎病毒和两种人类逆转录病毒以及几种潜在人类癌症病毒。上述病毒均已被世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)归为1类致癌物。许多病毒在自然感染或是人为接种下都能在动物体内诱发肿瘤。 病毒科名病毒人类癌症 生殖器肿瘤乳头瘤病毒科人乳头瘤病毒鳞状细胞癌霍奇金病B细胞淋巴瘤人痀疹病毒8卡波洛肉瘤嗜肝病毒科乙型肝炎病毒肝细胞癌多瘤病毒科Merkel细胞多瘤病毒Merkel细胞癌逆转录病毒科人类嗜T细胞病毒成人T细胞白血病人类免疫缺陷病毒艾滋病相关恶性肿瘤黄病毒科丙型肝炎病毒肝细胞癌RNA肿瘤病毒的研究揭示了细胞癌基因参与肿瘤形成；DNA肿瘤病毒的研究确立了细胞抑癌基因的作用。这些发现彻底改变了癌症生物学，为癌变的分子机制提供了理论基础。


医学微生物学 病毒科名病毒人类癌症 1.肿瘤病毒的类型肿瘤病毒根据其基因组核酸类型和病毒粒子的生物物理特性，可分为不同的病毒科。大多数公认的肿瘤病毒或具有DNA基因组，或在感染细胞后可产生DNA前病毒（丙型肝兀4t}炎病毒除外）。DNA肿瘤病毒主要包括乳头瘤病毒、多瘤病毒、腺病毒、瘛疹病毒、嗜肝病毒和痉病毒。DNA肿瘤病毒编码病毒复制必需的蛋白通常也影响宿主细胞生长控制通路。大多数RNA肿瘤病毒属于逆转录病毒科。RNA肿瘤病毒根据肿瘤诱导能力可分为两种类型。高度致癌（直接转化）病毒携带细胞来源的癌基因。弱致癌（慢转化）病毒不含癌基因，其通过间接机制经长时间的潜伏后诱发肿瘤。人类中已知的两种致癌逆转录病毒都属于后面这种类型。丙型肝炎病毒是一种黄病毒，不会产生前病毒，间接诱发癌症。2.癌症发生的步骤癌症发生是一个多步骤过程，须经多种遗传变化才能将正常细胞转化为恶性细胞。研究表明，无论是否涉及病毒感染，肿瘤的发生发展均涉及多种细胞癌基因的激活和抑癌基因的失活。肿瘤病毒通常充当辅因子，提供产生恶性细胞所需的一些步骤。肿瘤形成不是肿瘤病毒感染的必然结果，病毒通常作为肿瘤发生过程的诱生者，并可能通过不同的机制来实现。


医学微生物学 第二节抗病毒免疫 由千病毒的生物学性状特殊，且与宿主细胞关系极为密切，抗病毒免疫除具抗菌免疫的共性外，还有其特殊性（表23-4)。 免疫因素免疫机制 巨噬细胞可吞噬血液中病毒颗粒，使被调理的病毒颗粒灭活，将病毒抗原递呈给T细胞IFN诱导细胞产生抗病毒蛋白，抑制病毒复制，在病毒感染早期起作用NK细胞释放TNF-a、B和IFN－丫，非特异性杀伤病毒感染的靶细胞，在感染早期发挥作用抗体中和抗体能阻止病毒吸附，有调理作用，主要对细胞外游离的病毒起作用T细胞其中Th l细胞反应比Th2更重要。CTL能同靶细胞表面的病毒抗原反应，杀伤靶细胞，清除细胞抗病毒固有免疫是针对病毒感染的第一道防线。干扰素、细胞因子、巨噬细胞和NK细胞等因素，均针对病毒的进入迅速发生反应，并且激活适应性免疫防御系统。通常固有免疫防御可控制病毒感染，防止临床症状出现。其中，干扰素、巨噬细胞和NK细胞起主要作用。


医学微生物学 （一）干扰素 干扰素(interferon, IFN)是病毒或其他干扰素诱生剂刺激人或动物细胞所产生的一种糖蛋白，具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等多种生物学活性。RNA病毒较DNA病毒具有更强的干扰素诱生作用，细菌内毒素、人工合成的双链RNA等诱生剂也可诱导干扰素的产生。巨噬细胞、淋巴细胞及体细胞均可产生干扰素。干扰素具有广谱抗病毒作用，IFN不直接杀伤病毒，而是通过与细胞表面干扰素受体结合，激活IFN下游信号通路、诱导细胞产生抗病毒效应蛋白或分子，从而发挥广谱抗病毒作用。干扰素抗病毒作用具有种属特异性，一般同一种属细胞产生的干扰素在同种体内应用活性最佳，而对不同种属细胞则无活性。


医学微生物学 （一）干扰素 1.种类与性质由人类细胞诱生的干扰素，根据其不同的抗原性分为mB和丫三种；每种又根据其氨基酸序列不同分若干亚型。IFN-cx主要由人白细胞产生，IFN-[3主要由人成纤维细胞产生，两者均属于I型干扰素，抗病毒作用强于免疫调节作用。IFN--y由T细胞和NK细胞产生，也称免疫干扰素，属lI型干扰素，其免疫调节作用强千抗病毒作用。IFN--y亦称为巨噬细胞活化因子，是致Thl反应的组分之一。编码产生人IFN的基因分别位于第9对染色体的短臂(IFN-cx、IFN-[3)以及第12对染色体的长臂上(IFN－寸。目前上市的三种干扰素均为基因工程产品。干扰素分子量小，对热比较稳定，4屯可保存较长时间，－20°C可长期保存活性，56°C被灭活；可被蛋白酶破坏。


医学微生物学 （一）干扰素 2.抗病毒活性干扰素不能直接灭活病毒，而是通过诱导细胞合成抗病毒蛋白(antiviral protein, AVP)发挥效应。干扰素首先与敏感细胞表面的干扰素受体结合，触发信号传递等一系列的生物化学过程，激活细胞内基因合成多种AVP从而实现对病毒的抑制作用。AVP主要有2',5'－腺嗦呤核昔合成酶(2',5'-A合成酶）和蛋白激酶(protei n kinase R, PKR)等。其作用机制有2',5'-A合成酶途径和PKR途径，两种途径的激活都需要病毒中间产物双链RNA(dsRNA)的存在（图23-l)。除上述两种主要的AVP外，干扰素它干扰素受体尚可诱导细胞产生其他种类的AVP，不同I的干扰素诱导蛋白（抗病毒蛋白）介导不抗病毒同的抗病毒机制。2',5'（A)合成酶,1I产生益白激酶(1)2',5'-A合成酶途径：2',5'-A合ATP、dsRNA dsRNA成酶可导致病毒mRNA的降解。其作用机制是：心由dsRNA激活2',5'-A合成2', S'(A)激活蛋白激酶酶，使ATP多聚化，形成不定长度的寡聚腺昔酸(2',5'-A);(2)2',5'-A再活化RNA ATP酶L(RNaseL)；＠活化的RNaseL可切断病毒mRNA。激活RNaseL蛋白翻译起始因子eIF磷酸化(2)PKR途径：PKR使蛋白翻译起始因子eIF磷酸化而失去活性。其作用机制是：心PKR在dsRNA存在下产生自降解mRNA抑制蛋白质翻译身磷酸化而被激活；＠活化的PKR作用于一种通用的翻译起始因子eIF2的a亚基，使之磷酸化；＠磷酸化e IF2-a失去协助tRNA转运对应千起始密码子AUG的甲硫氨酸(M e t)的能力，故破坏了蛋白质翻译起始过程，导致病毒多肤链合成受阻。图23-1干扰素抑制病毒蛋白翻译的两种途径干扰素发挥作用迅速，在感染的几小时内就能起作用，抗病毒状态可持续2~3天。IFN合成后很快释放到细胞外，扩散至邻近细胞发挥抗病毒作用。因此干扰素既能中断受感染细胞的病毒感染，又能限制病毒扩散。在感染的起始阶段即适应性免疫发生作用之前，干扰素发挥重要作用。干扰素的抗病毒作用具有广谱性。理论上讲，干扰素对多数病毒均有一定抑制作用。但近年来，已发现许多病毒巳形成了一些较为复杂的机制来对抗或逃避干扰素的抗病毒作用。有效的抗病毒治疗需要正确选用干扰素的亚型（如IFN飞），维持其在体内有效的浓度和迅速释放。


医学微生物学 （一）干扰素 临床已将I型IFN制剂（如PEG-IFN飞）用千治疗某些重要的急、慢性病毒性疾病，如带状痀疹、慢性乙型肝炎以及丙型肝炎等。干扰素的毒性作用和病毒对干扰素的桔抗或逃逸，是目前限制其在临床广泛应用的重要原因。3免疫调节及抗肿瘤活性干扰素还具有免疫调节作用，其中IFN--y尤为重要。包括激活巨噬细胞，活化NK细胞，促进细胞MHC抗原的表达，增强淋巴细胞对靶细胞的杀伤等。此外，干扰素还能直接抑制肿瘤细胞的生长，被用于某些癌症的治疗中。但是，干扰素治疗有流感病毒样副作用，譬如冷战、发热和疲劳。


医学微生物学 （一）干扰素 （二）先天不感受性主要取决于细胞膜上有无病毒受体。机体的遗传因素决定了种属和个体对病毒感染的差异。如有些动物病毒不能使人感染；也有些人类病毒不能进入动物细胞内增殖，如脊髓灰质炎及麻疹病毒，因为动物细胞膜上无相应的受体而不被感染。（三）屏障作用血脑屏障能阻挡病毒经血流进入中枢神经系统。胎盘屏障保护胎儿免受母体所感染病毒的侵害，但其屏障的保护作用与妊娠时期有关。妊娠3个月以内，胎盘屏障尚未发育完善。在此期间，孕妇若感染风疹病毒或巨细胞病毒，极易通过胎盘感染胎儿，引起先天性畸形或流产。（四）细胞作用巨噬细胞(macrophage, M中）对阻止病毒感染和促使病毒感染的恢复具有重要作用。如果M中受损，病毒易侵入血流引起病毒血症。中性粒细胞虽也能吞噬病毒，但不能将其杀灭，病毒在其中还能增殖，反而将病毒带到全身，引起扩散。NK细胞能杀伤许多病毒感染的靶细胞，是抗病毒感染中主要的固有免疫杀伤细胞，IFN－丫可增强其活性，活化的NK细胞还可通过释放TNF-a或IFN－丫等细胞因子发挥抗病毒效应。


医学微生物学 （二）细胞免疫 细胞免疫在抗病毒感染中起着重要作用，可从各种先天性免疫异常病人对病毒感染的抵抗力的差异加以证实。构成病毒适应性细胞免疫应答的主要效应因素是CD8十细胞毒性T细胞(CTL)和CD4十辅助性细胞(Th l)。 三、抗病毒免疫持续时间 抗病毒免疫持续时间的长短在各种病毒之间差异很大，但一般来讲具有以下特点：1有病毒血症的全身性病毒感染，由于病毒抗原能与免疫系统广泛接触，病后往往免疫较为牢固，且持续时间较长，如水症、天花、腮腺炎麻疹脊髓灰质炎病毒等。另一类病毒感染往往只局限千局部或黏膜表面，无病毒血症，这类病毒常引起短暂的免疫，宿主可多次感染。如可引起普通感冒的鼻病毒等。2.只有单一血清型的病毒感染，病后有牢固性免疫，持续时间长，如乙型脑炎病毒。而鼻病毒则因血清型别多（已有100多个血清型），通过感染所建立的免疫对其他型病毒无免疫作用。3易发生抗原变异的病毒感染，病后只产生短暂免疫力。例如，甲、乙型流感病毒表面抗原发生变异后，由于人群对变异病毒无免疫力，易引起流感的流行。（李凡）


医学微生物学 第二十四章病毒感染的检查方法与防治原则 病毒感染性疾病在人类疾病中占有十分重要的地位。病毒是非细胞型微生物，病毒性疾病的治疗不同于细菌等其他微生物，正确的病原学诊断不但有助于指导临床治疗，而且可为控制病毒性疾病的流行提供实验室依据。病毒性疾病的防治分为特异性防治和非特异性防治，前者包括接种疫苗、注射抗体、细胞免疫制剂等，后者包括使用抗病毒药物等。它们的应用对控制病毒性疾病的流行起到了重要的作用。 第一节病毒感染的检查方法 目前常用的病毒感染的微生物学检查程序主要包括标本的采集与送检、病毒的分离鉴定以及病毒感染的诊断。随着分子病毒学的发展，不断建立的新型快速诊断方法，极大地提高了病毒性感染的诊断水平。 一，标本的采集与送检 病毒标本的采集与送检原则与细菌的基本相似，但还要特别注意下列原则：1采集急性期标本用千分离病毒或检测病毒及其核酸的标本应采集病人急性期标本，以提高检出阳性率。2使用抗生素对本身带有其他微生物（如咽拭子、粪便）或易受污染的标本，进行病毒分离培养时，应使用抗生素以抑制标本中的细菌或真菌等生长繁殖。


医学微生物学 一，标本的采集与送检 3冷藏保存、快速送检因病毒在室温中易失去活性，故所采集的标本应低温保存并尽快送检。如需较长时间运送，应将标本置于装有冰块或维持低温的材料（如固态二氧化碳、低温凝胶袋等）的保温容器内冷藏。病变组织可置千含抗生素的50％甘油缓冲盐水中低温保存。不能立即检查的标本，应置于－70"C保存。4采集双份血清血清学检查标本的采取应在发病初期和病后2~3周内各取l份血清，以利千动态观察双份血清抗体效价。 二、病毒的分离与鉴定 由于病毒具有严格的细胞内寄生性，故应根据病毒的种类选用相应的组织细胞、鸡胚或敏感动物进行病毒的分离与鉴定，这是病毒性疾病病原学诊断的金标准。但因其方法复杂、要求严格且需较长时间，故不适合临床诊断，只适用千病毒的实验室研究或流行病学调查。一般在下述情况下需进行病毒的分离与鉴定：少需对疾病进行病原学的鉴别诊断；＠确定新的病毒性疾病或再发性病毒性疾病的病原体；＠对治疗疾病有指导性意义（尤其病程较长者）；＠监测病毒减毒活疫苗效果（如及时发现回复毒力的变异株等）；＠病毒性疾病的流行病学调查；＠病毒生物学性状等研究。


医学微生物学 (—)病毒的分离培养 1动物接种是最早的病毒分离方法，目前用得不多。可根据病毒的亲嗜性选择敏感动物及其适宜的接种部位，观察动物的发病情况，进行血清学检测，测定ID so和LDso等。该方法简便，实验结果易观察，对某些尚无敏感的细胞进行培养的病毒，该方法仍在沿用。但动物对许多人类病毒不敏感，或感染后症状不明显，而且动物体内常带有潜在病毒，应防止将这些潜在病毒误作接种的病原体。2鸡胚培养鸡胚对多种病毒敏感，通常选用孵化9~14天的鸡胚(emb1-yonated egg)，按病毒接种部位分为：心绒毛尿襄膜接种(allantochorion inoculation)，用于培养天花病毒、瘦苗病毒及人类疤疹病毒等；＠尿埏腔接种(allan toic cavity inoculation)，用千培养流感病毒及腮腺炎病毒等；＠羊膜腔接种(amniotic cavity inoculation)，用于流感病毒的初次分离培养；＠卵黄羲接种(yolk sac inoculation)，用于某些嗜神经病毒的培养。因鸡胚对流感病毒最敏感，故目前除分离流感病毒还继续选用外，其他病毒的分离基本已被细胞培养所取代。


医学微生物学 (—)病毒的分离培养 3.细胞培养细胞培养法为病毒分离鉴定中最常用的方法。可根据细胞生长的方式分为单层细胞培养(monolayer cell culture)和悬浮细胞培养(suspended cell c ulture)。从细胞的来源、染色体特征及传代次数等可分为：心原代细胞(pri mm-y ce ll)，来源于动物、鸡胚或引产人胚组织的细胞（如人胚肾细胞等），对多种病毒敏感性高，但来源困难。＠二倍体细胞(diploid cell)，指细胞在体外分裂50~100代后仍保持2倍染色体数目的单层细胞。但经多次传代也会出现细胞老化，以至停止分裂。常用的二倍体细胞株有来自人胚肺的WI-26与WI-38株等，用于人类病毒的分离或病毒疫苗生产。＠传代细胞系(continuou s cell line)，由肿瘤细胞或二倍体细胞突变而来，能在体外持续传代，对病毒的敏感性稳定，因而被广泛应用。但不能用来源千肿瘤的传代细胞生产疫苗。


医学微生物学 （二）病毒的鉴定1病毒感染的常用鉴定方法 (1)病毒形态学鉴定：病毒悬液经高浓度浓缩和纯化后，借助磷鸽酸负染及电子显微镜可直接观察到病毒颗粒，根据形态、大小可初步判断病毒属于哪一科。如肠道病毒、登革病毒为圆形，狂犬病病毒为子弹形，呼肠病毒为六角形，疤疹病毒为圆形或多边形。大小也是鉴定病毒的依据之一，如小RNA病毒为20-40nm，症病毒为200-400nm。电镜技术已成为检测、分类和鉴定病毒的重要手段之一。(2)病毒血清学鉴定：即用已知的诊断血清对病毒进行种、型和亚型的鉴定。方法除常用的免疫标记法外，还有血凝抑制试验等。(3)病毒分子生物学鉴定：其方法主要包括核酸扩增、核酸杂交、基因芯片、基因测序等分子生物学技术。对于新分离出的未知病毒，尚需增加下列程序以便作出准确鉴定：心核酸类型的测定：用RNA酶及DNA酶，可鉴别出病毒核酸类型。此外，DNA病毒受5－氮尿啼唗的抑制，而RNA病毒不受影响。用此方法亦可区分DNA与RNA病毒；＠理化性状的检测：包括病毒颗粒的大小及结构、衣壳对称类型、有无包膜等；＠基因测序和生物对比等。


医学微生物学 2病毒在细胞中增殖的鉴定指标学毒病病变细胞正常细胞 一细胞的另一病毒的增殖，从而阻抑后者所特有的CPE。据此，可用不能产生CPE的病毒干扰随后接种且可产生CPE的病毒，以检测病毒的存在。如埃可病毒11型和风疹病毒均可感染猴肾细胞，前者单独感染可引起CPE，后者不能引起CPE，但可抑制随后接种的埃可病毒11型在细胞中的增殖，故可用千风疹病毒的检测。此方法因缺乏特异性而已被免疫学等方法所代替。 三、病毒感染的诊断 病毒感染的诊断非常复杂，常用方法可分为形态学检查、病毒成分检测和血清学诊断。(—)形态学检查1.电镜和免疫电镜检查含有高浓度病毒颗粒(;::107颗粒／ml)的样品，可直接应用电镜技术进行观察。对那些含低浓度病毒的样本，可用免疫电镜技术观察。即先将标本与特异抗血清混合，使病毒颗粒凝聚，这样更便千在电镜下观察，可提高病毒的检出率和特异性。


医学微生物学 三、病毒感染的诊断 2光学显微镜检查有些病毒在宿主细胞内增殖后，于细胞的一定部位（胞核、胞质或两者兼有）出现嗜酸性或嗜碱性包涵体，可在光学显微镜下观察到，对病毒感染的诊断有一定价值。如取可疑病犬的大脑海马回制成染色标本，发现细胞质内有内基小体便可确诊为狂犬病病毒感染，被咬者则需接种狂犬病疫苗。 （二）病毒成分检测 (4)基因测序技术：因目前对已发现的病毒全基因测序已基本完成，故可将所检测的病毒进行特征性基因序列测定并与这些基因库的病毒标准序列进行比较，以达到诊断病毒感染的目的。需要说明的是，病毒核酸检测阳性，并不代表标本中或病变部位一定有活病毒。对未知基因序列的病毒及新病毒不能采用这些方法检测。 （三）病毒感染的血清学诊断 采用血清学方法辅助诊断病毒性疾病，其原理是用已知病毒抗原来检测病人血清中有无相应抗体。遇下列情况时尤需作血清学诊断：心采取标本分离病毒为时已晚；＠目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒；＠为证实所分离病毒的临床意义；＠进行血清流行病学调查等。


医学微生物学 （三）病毒感染的血清学诊断 1．中和试验(neutralization test)病毒在细胞培养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验，常用于检测病人血清中抗体的消长情况。用系列稀释的病入血清与等体积的已知病毒悬液(100TCID50或100lD50)混合，在室温下作用一定时间后接种敏感细胞进行培养，以能保护半数细胞培养孔不产生CPE的血清最高稀释度作为终点效价。中和抗体是作用千病毒表面（衣壳或包膜）抗原的抗体，同种不同型病毒间一般无交叉，特异性高，而且抗体在体内维持时间长。中和抗体阳性不一定表示正在感染中，也可能因以前的隐性感染所致。因此，中和试验适用于人群免疫情况的调查，较少用于临床诊断。


医学微生物学 （三）病毒感染的血清学诊断 2.血凝抑制试验(hemagglu t ina tion inhibition test, HI)具有血凝素的病毒能凝集鸡、豚鼠和人等的红细胞，称血凝现象。这种现象能被相应抗体抑制，称血凝抑制。其原理是相应抗体与病毒结合后，阻抑了病毒表面的血凝素与红细胞的结合。本试验简易、经济，特异性高，常用千黏病毒、乙型脑炎病毒感染的辅助诊断及流行病学调查，也可鉴定病毒的型与亚型。3特异性lgM抗体检测病毒感染机体后，特异性IgM抗体出现较早，检测病毒IgM抗体可辅助诊断急性病毒感染。常用的方法包括ELISA和IFA,ELISA中又以IgM捕捉法最为特异。另外，检测早期抗原的抗体是快速诊断的另一途径。如检测针对EB病毒的早期抗原、核心抗原和衣壳抗原等的抗体，可以区别急性或慢性EB病毒感染。综上所述，病毒的分离鉴定、病毒抗原检测、病毒的核酸检测技术及血清学试验是病毒性疾患的主要检查手段，具体可根据病毒与所引起疾病的临床特点选择合适的检测方法。


医学微生物学 第二节病毒感染的特异性预防 病毒感染的特异性预防是应用适应性免疫的原理，以病毒抗原刺激机体，或给予抗病毒特异性免疫产物（如抗体、细胞因子等），使机体主动产生或被动获得抗病毒的特异性免疫，从而达到预防和治疗病毒感染性疾病的目的。 一、入工主动免疫常用生物制品 4基因工程疫苗(genetically engineering vaccine)采用DNA重组技术，提取编码病毒保护性抗原基因，将其插入载体，并导入细菌、酵母菌或哺乳动物细胞中表达、纯化后制成的疫苗。例如目前已广泛使用的重组乙肝疫苗(rHBsAg)。5重组载体疫苗(recombinant carrier vaccine)是指将编码病毒抗原的基因转入到载体，通常是减毒的病毒或细菌中制成的疫苗，瘢苗病毒是常用的载体，已被用于HAV、HBV、HSV、麻疹病毒等重组载体疫苗的研制。6.核酸疫苗(nucleic acid vaccine)目前研究较多的是DNA疫苗，是把编码病毒有效免疫原的基因克隆到真核质粒表达载体上，然后将重组的质粒DNA直接注射到宿主体内，使外源基因在活体内表达，产生的抗原刺激机体产生免疫反应。目前已被应用于多种病毒疫苗的研究。


医学微生物学 二、人工被动免疫常用生物制品 个免疫球蛋白主要是从正常人血浆中提取的丙种球蛋白(gammaglobulin)，可用于对某些病毒性疾病（如麻疹、甲型肝炎等）的紧急预防。此外，还有专门针对某一种特定病毒的高效价的特异性免疫球蛋白，如抗狂犬病的免疫球蛋白。2细胞免疫制剂目前临床用千治疗的细胞因子包括IFN飞、IFN-(3、IFN?、白细胞介素(I L-2、IL-6、IL-12等）、肿瘤坏死因子(TNF)、集落刺激因子(CSF)等。主要用于某些病毒性疾病和肿瘤的治疗。 第三节病毒感染的治疗 病毒为严格的细胞内寄生性微生物，抗病毒药物必须进入细胞内才能作用于病奇，且必须对病毒有选择性抑制作用而对宿主细胞或机体无损伤。但病毒的复制过程与宿主细胞的生物合成过程相似，两者难以区分，故很难获得理想的抗病毒药物。从理论上讲，病毒复制周期中的任何一个环节都可作为抗病毒药物作用的靶位，例如：阻止病毒吸附和穿入宿主细胞，阻碍病毒脱壳，干扰病毒核酸复制与生物合成，抑制病毒的装配、成熟和释放等。


医学微生物学 第三节病毒感染的治疗 近年随着分子病毒学及生物信息学的发展，应用计算机进行病毒分子的模拟，极大地提高了抗病毒药物的筛选和研制的效率，但仍不能满足临床病毒性疾病治疗的需要。病毒病的特异性药物治疗一直是医药学界关注和研究的热点。目前，抗病毒药物的应用仍有较大的局限性，其主要原因是：中药物靶位均是病毒复制周期中的某一环节，故对不复制的潜伏感染病毒（如疤疹病毒等）无效；＠某些复制突变率高的病毒（如H I V、甲型流感病毒等）易产生耐药毒株。 —抗病毒化学制剂 1.核苦类药物核甘类药物是最早用于临床的抗病毒药物，其作用机制主要是抑制病毒基因的转录和复制。主要用于RNA病毒感染的治疗，对细胞的核酸也有抑制作用。目前临床主要用于流感和呼吸道合胞病毒感染的治疗。3.蛋白酶抑制剂除了病毒聚合酶，病毒蛋白酶也是研究最多的抗病毒靶点之一，病毒特异性的蛋白酶抑制剂已成功应用于HIV和HCV感染。


医学微生物学 —抗病毒化学制剂 5神经氨酸酶抑制剂奥司他韦(oselta mi vir)和扎那米韦(zanamiv ir)是流感病毒神经氨酸酶(ne urarninid ase, NA)抑制剂。流感病毒神经氨酸酶通过切割唾液酸残基从被感染细胞中释放病毒颗粒，而奥司他韦和扎那米韦可抑制该酶的水解活性。 二、干扰素和干扰素诱生剂 1干扰素(IFN)具有广谱抗病毒作用，毒性小，使用同种IFN无抗原性，主要用于HBV、HCV、入类庖疹病毒和乳头瘤病毒等感染的治疗。2干扰素诱生剂中草药如黄苠、板蓝根、大青叶、贯众、镑娸菊以及甘草和大蒜提取物等均有抑制病毒的作用，对肠道病毒、呼吸道病毒、虫媒病毒、肝炎病毒感染有一定防治作用，其作用机制尚在研究中。


医学微生物学 四、新抗生素类 近年来抗病毒药物研究的进展表明，一些来自真菌、放线菌等微生物的抗生素具有抗病毒感染作用。例如真菌产物isochromophilones I和II及其衍生物能抑制HIV包膜表面gp l20与T细胞表面CD4分子结合，阻止病毒吸附和穿入细胞；放线菌产物ch l oropep tin s I和II也能有效抑制HIV gpl20与T细胞CD4分子结合；新霉素B是一种氨基糖昔类抗生素，可作用病毒复制中的调控因子，阻断RNA与蛋白质的结合，从而干扰病毒RNA的复制。 五、治疗性疫苗 所谓治疗性疫苗有别于传统的预防性疫苗，它是一种以治疗疾病为目的的新型疫苗，主要有DNA疫苗和抗原抗体复合物疫苗。国内外巳有学者将乙肝疫苗(HBsAg)与其抗体（抗HBs)及其编码基因一起制备治疗性疫苗用千病毒携带者及慢性乙肝的治疗。 六、治疗性抗体 治疗性抗体对于病毒感染性疾病的治疗具有重要作用，它可以通过中和病毒、杀伤感染细胞以及调节免疫等机制达到治疗目的。


医学微生物学 六、治疗性抗体 1998年美国FDA批准上市了第一个用于治疗病毒感染性疾病的具有中和活性的人源化鼠单克隆抗体帕利珠单抗(palivizu mab)，该抗体主要用于严重呼吸道合胞病毒(RSV)肺部感染的高危儿童。它是目前市场上唯一被批准上市的治疗病毒性疾病的单抗药物。此外，最近美国、加拿大联合研究的抗埃博拉病毒抗体ZMapp和我国学者研究的抗埃博拉病毒抗体MIL77，已被批准在紧急状态下用于埃博拉出血热病人的治疗，实践证明药效明确，且未见明显不良反应。


医学微生物学 七、基因治疗剂 抗病毒基因治疗(antiviral gene therapy)目前还处于研究阶段，尚未应用千人体，许多问题有待进一步解决。有如下几种治疗剂：1.反义寡核苦酸(ant isense oligonucleotide, as ON)根据病毒基因组的已知序列，设计能与病毒基因的某段序列互补的寡核昔酸，称为反义寡核昔酸，或反义核酸。反义寡核昔酸可在基因的复制、转录和翻译阶段起抑制病毒的复制作用。一般设计的寡核昔酸都是针对病毒基因中的某关键序列。反义RNA与病毒靶基因的mRNA互补结合后，可阻断病毒mRNA与核糖体的结合，从而抑制病毒蛋白的翻译。反义DNA可与病毒的关键序列结合，阻抑病毒DNA的复制和RNA的转录。2干扰RNA(short interfe ring RNA, siRNA)用双链短小RNA抑制相同序列病毒基因的表达，降解同源mRNA，通常双链RNA的长度要小于29个核甘酸。siRNA所引起的基因沉默作用不仅在注射部位的细胞内发生，并可转移到其他部位的组织和细胞，而且可传代，因此这种于扰现象具有放大效应。


医学微生物学 七、基因治疗剂 3.核酶(ribozyme)核酶是继反义RNA之后的又一种抑制病毒靶基因的基因治疗剂。一方面，核酶能识别特异的靶RNA序列，并与之互补结合，类似千反义核酸的特性；另一方面具有酶活性，能通过特异性位点切割降解靶RNA。因此设计核酶不仅要根据靶分子的序列，还要根据靶分子的结构特征。核酶通过切割病毒的基因组、mRNA，减少或消除病毒的转录物，从而抑制病毒的复制。但核酶的本质是RNA，易被组织中的RNA酶破坏，实际应用尚有困难。


医学微生物学 （吴兴安）第二十五章呼吸道病毒 呼吸道病毒(v i ru ses associated with resp iratory叫ections)是指以呼吸道为侵入门户，在呼吸道黏膜上皮细胞中增殖，引起呼吸道局部感染或呼吸道以外组织器官病变的一类病毒。主要包括正黏病毒科（流感病毒）、副黏病毒科（副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、亨德拉病毒、尼帕病毒和人偏肺病毒）、披膜病毒科（风疹病毒）、小RNA病毒科（鼻病毒）和冠状病毒科(SARS冠状病毒）等不同病毒科的多种病毒。此外，腺病毒、呼肠病毒、柯萨奇病毒与ECHO病毒、庖疹病毒等也可引起呼吸道感染性疾病。主要的呼吸道病毒及其所致呼吸道感染性疾病见表25-1。


医学微生物学 第一节正黏病毒 正黏病毒(Ortho myxoviridae)是指对人或某些动物细胞表面的黏蛋白有亲和性的一类有包膜的病毒，具有分节段的单负链RNA基因组。只有流行性感冒病毒(influen za v irus)一个种，简称流感病毒，包括人流感病毒和动物流感病毒。人流感病毒是人流行性感冒（流感）的病原体，分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型；其中甲型流感病毒抗原性易发生变异多次引起世界性大流行。如1918-1919年的世界性流感大流行，造成约4000万人死亡。 （二）复制周期 流感病毒感染宿主时，病毒HA与宿主呼吸道黏膜上皮细胞膜表面的受体唾液酸结合，引起细胞膜内陷，并以胞饮方式吞入病毒颗粒；随后在病毒M蛋白离子通道作用下，降低细胞内pH，引起HA蛋白变构，以及病毒包膜与细胞膜融合而释放病毒核衣壳进入细胞质。病毒核衣壳以vRNP形式，通过核膜孔从细胞质转移到细胞核内，启动病毒RNA的转录复制，生成的mRNA转移到胞质，指导合成病毒的结构蛋白和非结构蛋白，并装配流感病毒，最后以出芽方式释放出子代病毒颗粒。


医学微生物学 （三）分型与变异 根据NP和MP的抗原性不同，流感病毒被分为甲、乙、丙三型。根据病毒表面HA和NA抗原性的不同，甲型流感病毒又分为若干亚型，迄今发现HA有16种(1~16)抗原，NA有9种(1~9)抗原。目前，人类的甲型流感病毒亚型主要有Hl、H2、H3和Nl、N2抗原构成的亚型，1997年以来发现HSNl、H7N2、H7N7、H9N2等型禽流感病毒也可以感染人；乙型流感病毒间虽有变异大小之分，但未划分为亚型；丙型流感病毒未发现抗原变异与新亚型。


医学微生物学 （三）分型与变异 流感病毒变异包括抗原性变异、温度敏感性变异、宿主范围变异以及对非特异性抑制物敏感性变异等。抗原性变异是流感病毒变异的主要形式，病毒表面抗原HA和NA是主要的变异成分。在感染人类的三种流感病毒中，甲型流感病毒有着极强的变异性，乙型次之，而丙型流感病毒的抗原性非常稳定。流感病毒的抗原性变异包括抗原性转变(anti genic shift)和抗原性漂移(antigen i c drift)两种形式。抗原性转变属于质变，是指在自然流行条件下，甲型流感病毒表面的一种或两种抗原结构发生大幅度的变异，或者由于两种或两种以上甲型流感病毒感染同一细胞时发生基因重组，而形成与前次流行株的抗原结构不同的新亚型（如HlNl转变为H2N2等）的变异形式。由于人群缺少对变异病毒株的免疫力，变异形成的新亚型可与旧亚型交替出现或共同存在，引起人类之间的流感大流行。甲型流感病毒的抗原性变异及其引起的流感大流行见表25-3。代表病毒株型别／分离地点／亚型名称抗原结构流行年代毒株序号／分离年代（亚型）


医学微生物学 （三）分型与变异 Hsw!Nl Hl Nl1918—1919（西班牙流感）猪流感病毒相关(HI Nl)亚洲甲型(A l)HlNl1946—1957A/FM/1/4/(HlNl)亚洲甲型(A2)H2N21957—1968（亚洲流感）A/Singapore/1/57(H2N2)香港甲型H3N21968—1977（香港流感）A/Ho ngKong/1/68(H3N2)香港甲型与新甲型H3N2,H1N l1977—（俄罗斯流感）A/USSR/90/77(Hl Nl)新甲型H5Nl,HlNl1997—（高致病性禽流感、猪流感）A/California/7/2009(H1Nl)抗原性漂移属于量变，即亚型内变异，变异幅度小或连续变异，通常由病毒基因点突变和人群免疫力选择性降低引起，可引起小规模的流感流行。


医学微生物学 （四）培养特性 流感病毒能在鸡胚羊膜腔和尿囊腔中增殖。增殖的病毒游离千羊水或尿襄液中，用红细胞凝集试验可检出病毒。流感病毒在细胞培养（人羊膜、猴肾、狗肾、鸡胚等细胞）中可以增殖，但不引起明显的CPE，依HA的凝集与吸附红细胞能力建立的红细胞吸附试验(hemadsorp tion test)可以判定病毒感染与增殖情况。流感病毒在小鼠中连续传代可提高毒力，引起小鼠肺部广泛性病变或死亡。雪貂对流感病毒易感。 二、致病性和免疫性(—)致病性 流感病毒易发生抗原变异，是引起流行性感冒的主要病毒。甲型流感病毒除感染人类以外，还可以感染禽、猪、马等动物；乙型流感病毒可以感染人和猪；而丙型流感病毒只感染人类。流感病毒通常引起呼吸道局部感染，不引起病毒血症；多呈季节性广泛流行，北方以冬季为主，南方四季都有发生，在夏季和冬季达到高峰。传染源主要是感染者，其次为隐性感染者，感染的动物亦可传染人；主要传染途径是经飞沫、气溶胶通过呼吸道在人间传播。入群普遍易感，潜伏期长短取决于侵入病毒量和机体免疫状态，一般为1~4天。病毒感染呼吸道上皮细胞后，可迅速产生子代病毒并扩散和感染邻近细胞，引起广泛的细胞空泡变性；随后病人出现畏寒、头痛、发热、浑身酸痛、鼻塞、流涕、咳嗽等症状。在症状出现的1~2天内，病毒随分泌物大量排出，以后则迅速减少。流感发病率高，但病死率低，死亡病例多见于伴有细菌性感染等并发症的婴幼儿、老人等。1997年以来，我国香港和多个国家与地区发生了较大规模的H5Nl高致病性禽流感(highly pathogenic avian influe nza, HP A I)病例，累计禽流感病人达数百例。禽流感病毒不能在人类之间直接传播，但重组形成的新病毒可能引起人类之间流行。高致病性禽流感病毒H5N l的主要致病机制是影响干扰素等的抗病毒作用、激发机体免疫病理性损伤；其非结构蛋白NS I有重要作用。唾液酸是甲型和乙型流感病毒受体的基本成分，其末端携带的唾液酸－a－半乳糖－B－葡萄糖残基包括a-2、3-Gal-~1、4-Glu与a-2、6-Gal-~1、4-Glu残基两种，前者是禽流感病毒受体，主要分布千人下呼吸道的支气管和其前端的肺泡细胞上，后者是入流感病毒受体，主要分布于入咽喉和鼻腔的细胞表归[i}面，但两种类型受体均可以分布于猪气管上皮细胞表面。两种受体分布差异与禽流感病毒在入间扩散与传播有关。（二）免疫性在流感病毒感染或疫苗接种后，机体可形成特异性免疫应答。呼吸道黏膜局部分泌的slgA抗体有阻断病毒感染的保护作用，但只能短暂存留儿个月。血清中抗HA特异性抗体为中和抗体，有抗病毒感染、减轻病情的作用，可持续存在数月至数年；抗NA特异性抗体可以抑制病毒的释放与扩散，但不能中和病毒的感染性；抗NP特异性抗体具有型特异性，可用千病毒的分型。不同型别流感病毒感染不能诱导交叉性保护抗体的产生。流感病毒特异性CD4+T淋巴细胞可以辅助B淋巴细胞产生特异性抗体，CD8+T细胞可通过直接作用和溶解病毒感染细胞，发挥交叉抗病毒作用，参与病毒的清除与疾病的恢复。


医学微生物学 二、致病性和免疫性(—)致病性  三、微生物学检查 对于有典型临床损害的HPV感染，可根据临床表现迅速作出诊断；但对于亚临床感染的病例，则需进行细胞学、免疫学和分子生物学等实验室辅助诊断。1.核酸检测DNA分子杂交可用于HPV分型和实验室诊断。一般使用HPV共有序列或型特异性探针，可检测到组织中约50个HPV基因组拷贝；原位杂交可检测到组织切片上每个细胞最少10~15个病毒基因拷贝。最快速、特异、敏感的检测方法，是针对HPV DNA特异性保守区分别设计各型引物进行PCR扩增，再用特异性探针进行核酸杂交检测PCR扩增产物。2血清学试验以人工合成的病毒蛋白表位抗原或基因工程表达的HPV病毒样颗粒抗原设计VLP-ELISA，或用表达HPV融合蛋白为抗原的蛋白印迹法，可以检测病入血清中的抗体。 第二节副黏病毒 副黏病毒科(Paramyxovi ridae)包括副流感病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞病毒、腮腺炎病毒、尼帕病毒和人偏肺病毒。与正黏病毒相比，副黏病毒具有相似的病毒形态及血凝作用，但具有不同的基因结构、抗原性免疫性及致病性等。副黏病毒与正黏病毒的比较见表25-4。


医学微生物学 第二节副黏病毒 血凝特点有有溶血特点无有包膜表面蛋白HA蛋白和NA蛋白HN蛋白（副流感病毒、腮腺炎病毒）HA蛋白无NA蛋白（麻疹病毒）无HA蛋白和NA蛋白（冠状病毒、呼吸道合胞病毒、亨德拉病毒、尼帕病毒、人偏肺病毒）


医学微生物学 —、麻疹病毒 麻疹病毒(measles virus)属于副黏病毒科的麻疹病毒属(Morbillivirus)，是麻疹(measle s)的病原体。麻疹是一种传染性很强的急性传染病，常见于儿童，以皮丘疹、发热及呼吸道症状为特征，如无并发症，预后良好。麻疹是发展中国家儿童死亡的一个主要原因。此外，麻疹病毒感染还与亚急性硬化性全脑炎(subac ute sclerosing panencepha lit is, SSPE)的发生有关。（一）生物学性状1形态与结构麻疹病毒为球形或丝形，直径约120~250nm，有包膜，核衣壳呈螺旋对称，核心为不分节段的单负链RNA，基因组全长约16kb，包括N、P,M、F,H、L共6个基因，分别编码6种结构和功能蛋白，包括核蛋白(nucleoprotein, NP)、磷蛋白(phosphoprotein, P)、膜蛋白(membrane protein,M)、融合蛋白(fusion protein, F)、血凝素(h e m aggl utinin, HA)和依赖RNA的RNA聚合酶(large polym erase, L)。病毒表面有HA和溶血素(haemol ysin, HL)两种糖蛋白刺突，但没有NA。HA和HL有抗原性，可诱导产生保护性抗体。HA能与宿主细胞受体吸附，参与病毒感染，但只能凝集红细胞。HL具有溶血和促进感染细胞融合和形成多核巨细胞的作用。


医学微生物学 —、麻疹病毒 2培养特性病毒可在多种原代或传代细胞（如人胚肾、人羊膜、Vero、HeLa等细胞）中增殖，并出现细胞融合或形成多核巨细胞病变等。在病毒感染细胞质及细胞核内可见嗜酸性包涵体。3.抗原性麻疹病毒抗原性较稳定，只有一个血清型，但存在小幅度的抗原变异。根据麻疹病毒核蛋白基因C末端高变区或全长血凝素基因特点，可以将野生型麻疹病毒分为A~H8个基因群(ge netic group)，包括23个基因型(genotype)。4抵抗力麻疹病毒抵抗力较弱，加热56'C30分钟或常用消毒剂均可灭活，且对日光及紫外线敏感。（二）致病性与免疫性1致病性人是麻疹病毒的唯一自然储存宿主。传染源是急性期麻疹病人，在病人出疹前6天至出疹后3天内有传染性；主要通过飞沫传播，也可经病人用品或密切接触传播。麻疹传染性极强，易感者接触后几乎全部发病。潜伏期为9~12天。麻疹病毒经呼吸道进入机体后，首先感染具有麻疹病毒受体CD46分子的靶细胞，并在其中增殖，再侵入淋巴结增殖后，入血形成第一次病毒血症；同时病毒在全身淋巴组织中大量增殖后再次入血，形成第二次病毒血症。此时病人出现发热，以及病毒感染结膜、鼻咽黏膜和呼吸道黏膜等引起的上呼吸道卡他症状；病毒还可在真皮层内增殖，在口腔两颊内侧黏膜表面形成特征性的中心灰白、周围红色的Koplik斑(Koplik spots)。发病3天后，病人可出现特征性米棣样皮疹；麻疹患儿在皮疹出齐24小时后体温开始下降，1周左右呼吸道症状消退，皮疹变暗，有色素沉着。部分年幼体弱的患儿，易并发细菌性感染，如继发性细菌性肺炎、支气管炎和中耳炎等，是麻疹患儿死亡的主要原因。免疫缺陷儿童感染麻疹病毒，常无皮疹，但可发生严重致死性麻疹巨细胞肺炎。


医学微生物学 —、麻疹病毒 麻疹病毒感染后，大约有0. l％的病人可以发生迟发型超敏反应性疾病，引起脑脊髓炎，常千病愈1周后发生，呈典型的脱髓鞘病理学改变及明显的淋巴细胞浸润，伴有永久性后遗症，病死率为15%。另外，约百万分之一的麻疹病入，在疾病恢复后数年内或在学龄期前，可以发生亚急性硬化性全脑炎，为急性病毒感染的迟发并发症，表现为渐进性大脑衰退，一般在1~2年内死亡。在病人血清及脑脊液中可以检测到高效价的lgG或lgM抗麻疹病毒抗体，但是麻疹病毒的分离很困难，推测可能是由千脑细胞内存在的麻疹病寄是缺陷病毒，因M基因变异而不能合成麻疹病毒M蛋白，导致病毒不能正常装配、出芽与释放。将SSPE尸检脑组织细胞与麻疹病毒敏感细胞（如HeLa、Vero等）进行共同培养，可分离出麻疹病毒。病毒受体是膜辅助蛋白(membra n e cofactor protein, MCP)和信号淋巴细胞活化分子(signaling Iymphocyte act ivation molecul e, SLAM)。


医学微生物学 —、麻疹病毒 2免疫性麻疹愈后可获得终生免疫力，包括体液免疫和细胞免疫。感染后产生的抗HA抗体和HL抗体均有中和病毒作用，HL抗体还能阻止病毒在细胞间扩散；在感染初期以lgM抗体为主，随后以lgGl和lgG4抗体为主。细胞免疫有很强的保护作用，在麻疹恢复中起主导作用，即使伴有免疫球蛋白缺陷的麻疹病人也可能痊愈并抵抗再感染，但细胞免疫缺陷的麻疹病人预后很差。在出疹初期病入的末梢血中可检出特异的杀伤性T细胞。出生后6个月内的婴儿因从母体获得IgG抗体，故不易感染，但随着年龄增长，抗体逐渐消失，易感性也随之增加；故麻疹多见于6个月至5岁的婴幼儿。（三）微生物学检查法根据临床症状即可诊断典型麻疹，对轻症和不典型病例需要微生物学检查进行确诊。但病毒分离鉴定方法复杂、费时，因此常用血清学实验进行诊断。1病毒分离与鉴定取病人发病早期的血液、咽洗液或咽拭子，经抗生素处理后接种于人胚肾、猴肾或人羊膜细胞中进行病毒分离培养；病毒增殖缓慢，7～l0天后可出现典型CPE，形成多核巨细胞、胞内或核内嗜酸性包涵体等；用免疫荧光技术检测病变细胞中的麻疹病毒抗原等可以进行病毒鉴定。


医学微生物学 —、麻疹病毒 2血清学诊断取病人急性期和恢复期双份血清，进行HI试验、CF试验或中和试验等，可以检测病毒特异性抗体。当抗体滴度增高4倍以上时，可辅助诊断麻疹病毒感染。此外，用间接荧光抗体法或ELISA检测l gM抗体，可以辅助早期诊断。3快速诊断采集病人咽漱液中的黏膜细胞，用荧光标记抗体检查麻疹病毒抗原，或用核酸分子杂交技术、RT-PCR技术等检测病毒核酸，可以快速诊断麻疹病毒感染。（四）防治原则预防麻疹的主要措施是隔离病人，以及进行人工主动免疫提高儿童免疫力。儿童在8月龄接种1剂麻疹－风疹联合减毒活疫苗（麻风疫苗，m eas l es-rub e ll a vacc ine, MR)，在18~24月龄接种l剂麻疹－腮腺炎－风疹三联疫苗(meas l es-mumps-rub e ll a vaccine, MMR)。疫苗接种后抗体阳转率达90％以上，免疫力可持续l0~15年。对千与麻疹患儿有密切接触，但未注射过疫苗的易感儿童，可在接触后5天内肌注麻疹恢复期病入血清或丙种球蛋白等进行被动免疫，有一定的预防效果。


医学微生物学 二、腮腺炎病毒 腮腺炎病毒(mump s vims)属千副黏病毒科的德国麻疹病毒属(Rubulavirus)，主要引起流行性腮腺炎，以腮腺肿胀、疼痛为主要症状，多见千儿童。腮腺炎病毒呈球形，直径为100~200nm，核衣壳呈螺旋对称。核酸为非分节段的单负链RNA，长15.3kb，共编码7种蛋白，即核蛋白（N）、磷蛋白(P)、膜蛋白(M)、融合蛋白（F)、小疏水蛋白(small hydrophobic protein, SH)、血凝素／神经氨酸酶(HN)和依赖RNA的RNA聚合酶（L)。病毒包膜上有HA和NA糖蛋白刺突。腮腺炎病毒仅有一个血清型。根据病毒SH基因序列的差异可以区分出A~K共11个基因型。腮腺炎病毒可在鸡胚羊膜腔内增殖，在猴肾细胞等细胞培养中增殖能引起细胞融合，形成多核巨细胞。人是腮腺炎病毒唯一储存宿主，主要通过飞沫传播。病毒首先千鼻或呼吸道上皮细胞中增殖，随后入血引起病毒血症，并扩散感染至唾液腺及其他器官，还可引起部分病人的胰腺、睾丸或卵巢等感染，严重者可并发脑炎。


医学微生物学 二、腮腺炎病毒 疾病潜伏期为7~25天，平均为18天。排毒期为发病前6天至发病后1周。病人表现为软弱无力、食欲减退等前驱期症状，随即出现腮腺肿大、疼痛，并伴有低热。病程大约持续7~12天。病后可获持久免疫力，6个月以内婴儿可从母体获得特异性抗体，而不易患腮腺炎。根据典型病例的临床表现，腮腺炎易千诊断，但不典型病例需做病毒分离或血清学诊断，也可用RT-PCR或核酸序列测定方法进行实验室诊断。腮腺炎的预防以隔离病人，减少传播机会和接种疫苗为主。目前，采用麻疹－腮腺炎－风疹三联疫苗(MMR)进行接种，免疫保护效果较好。尚无有效药物治疗，中草药有一定治疗效果。 三、呼吸道合胞病毒 呼吸道合胞病毒(res piratory syncytial virus, RSV)属千副黏病毒科的肺病毒属(Pneumovirus)，只有一个血清型。主要引起6个月以下婴儿患细支气管炎和肺炎等下呼吸道感染，以及较大儿童和成人的鼻炎、感冒等上呼吸道感染。


医学微生物学 三、呼吸道合胞病毒 病毒形态为球形，直径为120~200nm，有包膜，基因组为非分节段的单负链RNA，主要编码lO种蛋白质，即融合蛋白(F)、黏附蛋白(G)和小疏水蛋白(SH)三种跨膜蛋白，两种基质蛋白Ml和M2，三种与病毒RNA相结合形成核衣壳的蛋白(N、P和L)，两种非结构蛋白(NSl和NS2)。病毒包膜上有糖蛋白组成的刺突，无HA、NA和HL。该病毒不能在鸡胚中生长，但可在多种培养细胞中缓慢增殖，约2~3周出现细胞病变。病变特点是形成细胞融合形成的多核巨细胞，胞质内有嗜酸性包涵体。病毒抵抗力较弱，对热、酸及胆汁以及冻融处理敏感，因此最好是直接将标本接种至培养细胞中，避免冻存处理。


医学微生物学 三、呼吸道合胞病毒 RSV感染流行于冬季和早春，传染性较强，主要经飞沫传播，或经污染的手和物体表面传播。病毒首先在鼻咽上皮细胞中增殖，随后扩散至下呼吸道，但不形成病毒血症。潜伏期为4~5天，可持续1~5周内释放病毒。RSV感染仅引起轻微的呼吸道纤毛上皮细胞损伤，但在2~6个月的婴幼儿感染中，可引起细支气管炎和肺炎等严重呼吸道疾病，其发生机制除病毒感染直接作用外，可能与婴幼儿呼吸道组织学特性、免疫功能发育未完善及免疫病理损伤有关。而且，严重RSV疾病免疫病理损伤主要是机体产生特异性IgE抗体与RSV相互作用引起I型超敏反应的结果，与血清中IgG抗体无关。RSV所致疾病在临床上与其他病毒或细菌所致类似疾病难以区别，因此需要进行病毒分离和抗体检查，但操作复杂、费时。常用免疫荧光试验等直接检查咽部脱落上皮细胞内的RSV抗原，以及RT-PCR检测病毒核酸等进行辅助诊断。尚无特异性的治疗药物和预防疫苗。


医学微生物学 四、副流感病毒 副流感病毒(parainfluenza virus)属千副黏病毒科的德国麻疹病毒属。病毒呈球形，直径为125~250nm。核酸为不分节段的单负链RNA，主要编码融合蛋白F、凝血素／神经氨酸酶(HN)、基质蛋白(M)、核蛋白(N)聚合酶复合物(P+C)和RNA依赖的RNA聚合酶(L)蛋白。核衣壳呈螺旋对称，包膜上有两种刺突，一种是HN蛋白，具有HA和NA作用；另一种是F蛋白，具有融合细胞及溶解红细胞的作用。病毒RNA在细胞质内复制。根据抗原构造不同，副流感病毒分为5型。其中1、2、3型副流感病毒是感染入类的主要型别。病毒通过人间直接接触或飞沫传播，首先在呼吸道上皮细胞中增殖，一般不引起病毒血症。副流感病毒可引起各年龄段人群的上呼吸道感染，并可引起婴幼儿及儿童发生严重的呼吸道疾病，如小儿哮鹰细支气管炎和肺炎等。儿童感染的潜伏期尚不清楚，成人感染潜伏期为2~6天，感染1周内可以有病毒排出。所有婴儿可自母体获得副流感病毒抗体，但无保护作用。自然感染产生的s l gA对再感染有保护作用，但只能保持几个月，因此再感染多见。


医学微生物学 四、副流感病毒 实验室诊断主要通过细胞培养分离鉴定病毒，或用免疫荧光检查鼻咽部脱落细胞中的病毒抗原等来完成。尚无特异性的有效药物与疫苗。 五、亨德拉病毒与尼帕病毒 亨德拉病毒(Hendra virus, HeV)与尼帕病毒(N i pah virus, NiV)是近年发现的入兽共患的副黏病毒，属于副黏病毒科的亨尼帕病毒属(Henipavirus)。病毒的单股负链RNA基因组约18kb，包含N、P、M、F, G和L共6个基因读码框，分别编码核蛋白(N)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、融合蛋白(F)、黏附蛋白(G)和RNA依赖的RNA聚合酶(L)；其中P基因还可以编码V、C和W蛋白，是影响宿主免疫的病毒毒力因子。


医学微生物学 五、亨德拉病毒与尼帕病毒 亨德拉病毒、尼帕病毒感染主要通过密切接触的形式，在动物以及动物与人之间传播，果蝠(fru止bat)是主要的中间宿主。亨德拉病毒主要引起人和马的神经系统及呼吸系统感染，马是主要传染源；尼帕病毒主要引起人和猪的神经系统及呼吸系统感染，猪是主要传染源。病人主要表现为病毒脑炎，潜伏期为4~18天，初期症状轻微，呈类流感症状，随后出现高热、头痛、视力模糊和昏迷等症状，成人病人多见，80％以上为男性，致死率高，部分痊愈病人遗留不同程度的脑损伤。尚无特异性的治疗方法和疫苗。


医学微生物学 六、人偏肺病毒 人偏肺病毒(hum an metapneumovirus, HMPV)是2001年荷兰学者首次在不明原因的呼吸道感染儿童中分离出的一种新病毒，属于副黏病毒科的偏肺病毒属(Metapneu叩而us)，是偏肺病毒属中第一个人类病毒，具有类似副黏病毒的电镜形态与生化特征。HMPV的单负链RNA基因组约13.3kb，主要编码核蛋白(N)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、小疏水蛋白(SH)、黏附蛋白(G)、融合蛋白(F)、转运延长因子(M2-1)、RNA合成调节因子(M2-2)和RNA依赖的RNA聚合酶(L)共9种蛋白。HMPV在系统发生上有2个基因型，在血清学上为2个血清型及4个亚型。


医学微生物学 六、人偏肺病毒 HMPV主要经呼吸道传播，引起与RSV感染相似的症状，但病情较缓和，病程较短。人群普遍易感，低龄儿童、老年人和免疫功能受损入群中发病率较高，并可造成致死性感染。通常表现为毛细支气管炎、肺炎、上呼吸道感染、眼结合膜炎、中耳炎等，如与其他呼吸道病毒混合感染时症状加重，易合并心力衰竭呼吸衰竭。病毒感染与复制主要局限于呼吸道纤毛上皮顶端，一般不累及I型肺泡细胞和肺吞噬细胞。在感染后2周可检测到特异性IgG抗体，4周达高峰，伴有NK细胞和T细胞明显减少。通过血清学诊断，以及对咽拭子标本进行病毒培养分离、RT-PCR或RT-qPCR等可辅助诊断。其中，针对病毒'N和L基因特异性的RT-qPCR是敏感、快速的诊断方法。尚无特异性的治疗药物和疫苗。


医学微生物学 第三节冠状病毒 冠状病毒(coronavirus)属于冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)。由于病毒包膜上有向四周伸出的突起，形如花冠而得名（图25-2)。冠状病毒感染动物和人。目前从入分离的冠状病毒主要有普通冠状病毒229E、OC43、NL63、HKUl、SARS冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus, SARS-Co V)和中东呼吸综合征冠状病毒(M iddl e East respirato1-y syndrome corona virus,MERS-CoV)六个型别。图25-2冠状病毒形态与结构A病毒形态（负染，x80000，透射电镜）；B病毒结构病毒直径约80-160nm，核衣壳呈螺旋对称，包膜表面有20nm的长管状或纤维状刺突，呈多形性花冠状突起。冠状病毒是基因组最大的RNA病毒。病毒基因组为非分节段的单正链RNA，约27~32kb，其3＇末端有poly A,裸露的RNA有感染性；分别编码核蛋白(N)、包含基质蛋白(matrix protein)的膜蛋白(M)、包膜蛋白（E）与包膜表面的剌突糖蛋白(spike glycoprotein, S)，以及RNA聚合酶(poly m erase,Pol)。某些病毒包膜上存在的血凝素眉旨酶蛋白(h emaggl utinin-es tera se protein, HE)，既有HA的血凝活性，又有类似NA的酣酶活性。病毒对乙酪、三氯甲烧、酷类、紫外线以及理化因子较敏感，37°C数小时便丧失感染性。冠状病毒可在人胚肾、肠、肺的原代细胞中生长，感染初期细胞病变不明显，连续传代后细胞病变明显加强；与冠状病毒属中其他巳知的成员不同，SARS-CoV可引起Vero细胞和FRhk-4细胞的CPE, SARS-Co V的受体是血管紧张素酶2(ang iotensin-co nverting enzyme2, ACE2)。冠状病毒229E的受体是氨基肤酶N(am inopeptidase N, APN)。


医学微生物学 第三节冠状病毒 （二）致病性与免疫性常见的冠状病毒主要感染成人或较大儿童，引起普通感冒、咽喉炎或成人腹泻，病毒经飞沫传播，粪口途径亦可以传播；主要在冬春季流行，疾病的潜伏期平均3~7天。病后免疫记忆不强，再感染仍可发生。冠状病毒的某些毒株还可引起严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome, SARS)和中东呼吸综合征(Midd l e East respiratory syndrome, MERS)等。SARS的主要症状有发热、咳嗽、头痛、肌肉痛及呼吸道感染症状，病死率约14%，尤以40岁以上或有潜在疾病者（如冠心病、糖尿病、哮喘以及慢性肺病）病死率高。编蝠可能是SARS-CoV的自然储存宿主。（三）微生物学检查与防治原则结合临床症状及实验室检验可以辅助诊断。SARS相关样品处理、病毒培养和动物试验需要在生


医学微生物学 第三节冠状病毒 。7物安全三级(biosafety level-3, BSL-3)实验室中进行。一般用细胞培养、器官培养等方法，对鼻分泌物、咽漱液等标本进行病毒分离。用双份血清做中和试验、ELISA等进行血清学诊断。用免疫荧光技术、酶免疫技术和RT-PCR技术检测病毒抗原或核酸等进行快速诊断。尚无特异性的治疗药物和预防疫苗。 第四节其他呼吸道病毒—、风疹病毒 风疹病毒(rubella virus, RV)为披膜病毒科(Togaviridae)风疹病毒属(Rub ivirus)的唯一成员，是风疹(rubell a, Germen measl es)的病原体，除引起儿童和成人普通风疹以外，还引起胎儿畸形等先天性风疹综合征(congenital mbella syndrome, CRS)，危害严重。


医学微生物学 第四节其他呼吸道病毒—、风疹病毒 风疹病毒为单股正链RNA病毒，直径约60nm，有包膜，核衣壳为二十面体对称，基因组全长9.7kb，含2个ORF。5'端为ORF l编码两个非结构蛋白(NSP),3'端为ORF2编码一条分子量为230kD的多聚蛋白前体，酶切后形成3种结构蛋白，即核衣壳蛋白(C)和两个包膜蛋白(E l和E2)。病毒包膜蛋白剌突有血凝性。风疹病毒只有一个血清型，能在细胞内增殖。风疹病毒对热、脂溶剂和紫外线敏感。


医学微生物学 第四节其他呼吸道病毒—、风疹病毒 人是风疹病毒唯一的自然宿主。风疹病毒经呼吸道传播，病毒在呼吸道局部淋巴结增殖后，经病毒血症播散全身，引起风疹。儿童风疹最为常见，通常在2周左右的潜伏期后，出现发热和轻微的麻疹样出疹，伴耳后和枕下淋巴结肿大等。成入感染风疹病毒的症状较严重，除出疹外，还有关节炎和关节疼痛、血小板减少、出疹后脑炎等。风疹病毒感染最严重的危害是通过垂直传播引起胎儿先天性感染，孕妇在孕期20周内感染风疹病毒对胎儿危害最大，病毒感染通过影响胎儿细胞的正常生长、有丝分裂和染色体结构等，导致流产或死胎，还可以引起先天性风疹综合征，如先天性心脏病、先天性耳聋、白内障等畸形，以及黄疽性肝炎、肺炎、脑膜脑炎等临床表现。风疹病毒自然感染后可获得持久免疫力，约95％以上的正常人血清中具有保护性抗体，孕妇血清中的抗体可以保护胎儿免受风疹病毒的感染。


医学微生物学 第四节其他呼吸道病毒—、风疹病毒 对孕妇感染风疹病毒进行早期诊断，可有效减少畸形儿的发生。常用的诊断方法有：心通过检测孕妇血液中的特异性IgM抗体进行早期诊断，或通过检测双份血清中病毒特异性抗体，若抗体滴度呈4倍以上增高也可辅助诊断；＠检测胎儿羊水或绒毛膜中的病毒抗原或病毒核酸等可以进行产前诊断；＠取羊水、绒毛膜可进行病毒分离，用红细胞凝集抑制试验和免疫荧光试验进行病毒鉴定，但比较繁琐。目前，风疹病毒感染尚无有效的治疗方法。风疹减毒活疫苗接种是预防风疹的有效措施，儿童在8月龄接种1剂麻风疫苗，在18~24月龄接种1剂麻疹－腮腺炎－风疹三联疫苗，可以获得高水平的抗体，并保持十数年以上或终身免疫。


医学微生物学 二、腺病毒 腺病毒(adenovims)属千腺病毒科(Adenoviridae)哺乳动物腺病毒属(Mastadenovirus)。腺病毒颗粒直径为60~90nm，无包膜；基因组为线状DNA，约3.6kb；衣壳呈二十面体立体对称，由252个壳粒组成，其中240个壳粒是六邻体(hexon)，含有组特异性Q抗原；位千二十面体顶端的12个壳粒组成五邻体(penton)；每个五邻体包括基底部分和伸出表面的一根末端有顶球的纤突；基底部分含有组特异性B抗原和毒素样活性，可引起细胞病变；纤突蛋白包含型特异性'Y抗原主i病毒凝集动物红细胞活性有关（图25-3)。HeLa细胞和入胚原代细胞对腺病毒敏感，能引起明显的细胞病变。耐温、耐酸、耐脂溶剂的能力较强，56"C30分钟可被灭活。


医学微生物学 二、腺病毒 人类腺病毒分为A~G共7组，42个血清型；多数可以引起人类呼吸道、胃肠道、泌尿道及眼部感染等。腺病毒主要通过呼吸道传播，3、7、11、21、14型等主要引起婴幼儿肺炎和上呼吸道感染；其中图25-3腺病毒电镜形态与结构模式图A病毒形态（负染，x500000，透射电镜）；B.病毒结构3型和7型腺病毒为腺病毒肺炎的主要病原。此外，3、7、14型可以引起咽结膜热(pharyngoconjunctival fever, PCF),8、19、31型可以引起流行性角膜炎(epidemic keratoconjunctiviti s, EKC),40、41型可以引起儿童病毒性胃肠炎。


医学微生物学 二、腺病毒 腺病毒肺炎约占病毒性肺炎的20%-30%，在北方多见于冬春两季，南方多见千秋季。由于缺乏腺病毒特异抗体，80％的腺病毒肺炎发生千6个月至2岁的婴幼儿。潜伏期3~8天。多以骤热(39°C以上）、咳嗽、呼吸困难及发组等呼吸道症状为主，有时出现嗜睡、惊厥、腹泻、结膜炎，甚至心力衰竭等。学龄前期与学龄期儿童的腺病毒肺炎以持续高热为主，其他症状较轻。主要病理改变是灶性或融合性坏死性肺浸润和支气管炎，还伴有中枢神经系统及心脏的间质性炎症与小血管壁细胞增生反应。根据流行情况和临床表现可初步诊断腺病毒肺炎。用间接免疫荧光技术、ELISA检测特异性IgM可以进行快速诊断，但不能进行腺病毒分型。常规咽拭子病毒分离及双份血清抗体检查可用于回顾诊断。以对症治疗和抗病毒治疗为主。尚缺乏有效的抗病毒药物与疫苗。


医学微生物学 三、鼻病毒 毋病毒(rhinovirus)属于小RNA病毒科(Picornaviridae)鼻病毒属(Rhin叩rus)，病毒颗粒由病毒单股正链RNA与VPI-VP4蛋白组成，呈二十面体立体对称，有114种血清型。鼻病毒具有与肠道病毒相似的结构、组成与生物学性状，但有与肠道病毒不同的特点，包括：心鼻病毒需要在33°C旋转培养条件下，于人胚肾、人胚二倍体细胞或人胚气管培养中增殖；＠鼻病毒不耐酸，在pH3.0时迅速被灭活。细胞间黏附分子－I(ICAM-1)是鼻病毒感染细胞的受体。鼻病毒通常寄居于上呼吸道，可引起成人普通感冒以及儿童的上呼吸道感染、支气管炎等。潜伏期为24~48小时，临床症状有流涕、鼻塞、头痛、咳嗽，体温升高不明显。多为自限性疾病，1周左右可自愈。鼻病毒感染后可产生呼吸道局部slgA，对同型病毒有免疫力，持续时间短。另外，多个型别的鼻病毒可发生抗原性漂移，因而可引起反复再感染。微生物学检查临床诊断意义不大。干扰素有一定\治疗效果。


医学微生物学 四、呼肠病毒 呼肠病毒(reovirus)属于呼肠病毒科(Reoviridae)呼肠病毒属(Reovirus)。病毒直径60-80nm，基因组为10个节段的双链RNA，外被为二十面体立体对称的双层蛋白质衣壳，无包膜，有3个血清型。呼肠病毒对动物具有广泛的致病性，在入类主要引起无症状的感染，少数人可引起胃肠道疾病、上呼吸道疾病和神经系统疾病，较少数病人可能出现严重并发症。 （张凤民）第二十六章肠道病 肠道病毒(enterovirus)是指经消化道感染和传播、能在肠道中复制、并引起人类相关疾病的胃肠道感染病毒(gastrointestinal infection v i rus)。肠道病毒虽然主要经消化道传播和感染，但引起的主要疾病却在肠道外，包括脊髓灰质炎、无菌性脑膜炎、心肌炎、手足口病等多种疾病。


医学微生物学 （张凤民）第二十六章肠道病 肠道病毒在分类学上归属于小RNA病毒科(Picornaviridae)下的肠道病毒属(Enterov订us,EV)，是一类生物学性状相似、病毒颗粒非常小的单正链RNA病毒。2016年，国际病毒命名委员会(ICTV)将小RNA病毒科分为35个病毒属，其中肠道病毒属下有7个病毒种可以感染人类，即甲～丁种肠道病毒(EV-A、B、C、D)和甲～丙种鼻病毒(RV-A、B、C)。人肠道病毒(human en terovirus, HEV)是指仅可感染入类的甲～丁种肠道病毒（表26-1)。虽然甲～丙种鼻病毒也感染入并引起入普通感冒，但不称其为人肠道病毒。20世纪50年代，入肠道病毒的分类是依据其对人类和实验动物的致病性、体外培养引起的细胞病变效应等，并分为脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒A组和B组、埃可病毒等。由千新型肠道病毒不断被发现，原来的血清型标准无法对其归类，ICTV决定按其发现顺序统一命名，如EV68、EV69、EV70和EV71等。迄今已发现有100多种不同血清型的人肠道病毒，其与病毒种的关系见表26-1。病毒种病毒血清型甲种肠道病毒(EV-A)coxsackievirus(CV)-A2-A8, CV-AlO, CV-Al2CV-Al4CV-Al6; enterovirus(EV)A71,EV-A76,EV-A89-A92,EV-All4,EV-All9,EV-Al20, EV-Al21乙种肠道病毒(EV-B)CV-Bl-B6;CV-A9; echovirus(E)l-E7, E9, Ell-21, E24-E27, E29-E33; EV-B69, EVB73-B75, EV-B77-B88, EV-B93, EV-B97, EV-B98, EV-BlOO, EV-BlOl, EV-B106, EVB107,EV-Bll O,EV-Blll丙种肠道病毒(EV-C)poliovirus(PV)1-3; CV-Al, CV-Al1, CV-Al3, CV-Al7, CV-Al9-A22, CV-A24; EVC95, EV-C96, EV-C99, EV-C102, EV-Cl04, EV-Cl05, EV-Cl09, EV-Cll3, EVCl16-Cl18丁种肠道病毒(EV-D)EV-D68, D70,D94,D111肠道病毒具有以下共同特征：1.形态结构肠道病毒为无包膜的小RNA病毒，直径24~30nm，衣壳为二十面体立体对称。基因组为单正链RNA(+ssRNA)，长约7.4kb，两端为保守的非编码区(UTR)，中间为Pl、P2和P3连续的一个开放读码框，编码一个约2200个氨基酸的大分子前体蛋白。此外，5＇端共价结合一小分子蛋2.培养特性多数肠道病毒能在有相应膜受体的易感细胞中增殖，迅速产生细胞病变；但柯萨奇病毒A组的某些型别（如A l、A l9和A22)，只能在新生乳鼠体内增殖。


医学微生物学 （张凤民）第二十六章肠道病 3抵抗力对理化因素的抵抗力较强，在污水、和粪便中能存活数月；对酸有一定抵抗力，在pH3.0-5.0的酸性条件下作用l~3小时还保持稳定；能耐受蛋白酶和胆汁的作用；对乙酰、热和去垢剂有一定抗性，1mol/L MgC l2或其他二价阳离子能明显提高病毒对热的抵抗力。4传播途径主要经粪一口途径传播，以隐性感染多见。虽然肠道病毒在肠道中增殖，却引起多种肠道外感染性疾病，如脊髓灰质炎、无菌性脑膜炎、心肌炎以及急性出血性结膜炎等。一种型别的肠道病毒可引起几种疾病或病征，而一种疾病或病征又可由不同型别的肠道病毒引起。


医学微生物学 第一节脊髓灰质炎病毒 脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)是脊髓灰质炎(poliomyel itis)的病原体，ICTV将其归属于丙种肠道病毒(EV-C，参见表26-1)。脊髓灰质炎病毒主要侵犯脊髓前角运动神经元，导致急性弛缓性肢体麻痹(ac ute flaccid paralysis, AFP)，病人以儿童多见，故亦称小儿麻痹症(infan t ile paraly sis)。脊髓灰质炎病毒分为I、II、III三个血清型(PVI-3)，各型间没有交叉免疫反应，但85％左右的脊髓灰质炎病人均由I型病毒引起。通过相应疫苗接种可有效地预防脊髓灰质炎发生，WHO已将脊髓灰质炎列为第二个在全球消灭的病毒感染性疾病。


医学微生物学 2基因组与编码蛋白病毒基因组为单正链RNA，长约 7.4kb。基因组中间为连续开放读码框，两端为保守的非编码区，非编码区与其他肠道病毒的非编码区具有很高的同源性。此外，5'端共价结合一小分子蛋白质Vpg（由22~24个氨基酸组成），与病毒RNA合成和基因组装配有关；3＇端带有p olyA尾，可增强病毒的感染性。病毒RNA进入细胞后，可直接作为mRNA，翻译出一个约2200个氨基酸的大分子多聚蛋白(polyprote in)前体，然后经图26-2I型沓髓灰质炎病酶切后形成病毒结构蛋白VPl~VP4和各种功能性蛋白。功能性毒电镜图(X594000)蛋白包括2A~2C、3A-3D，其中至少含两个蛋白酶和一个依赖RNA的RNA聚合酶。脊髓灰质炎病毒还产生一种功能性蛋白，可降解真核细胞核糖体200kD帽结合蛋白，以此封闭细胞mRNA的翻译。


医学微生物学 2基因组与编码蛋白病毒基因组为单正链RNA，长约 VP l、VP2和VP3暴露在病毒衣壳表面，但VP1是外露的主要衣壳蛋白，与病毒吸附有关；带有可诱生中和抗体的抗原表位，诱导产生的抗体还可用千对病毒分型。位千衣壳内部的VP4在VP l与细胞表面受体结合后才被释出，病毒衣壳也随之松动并有助于病毒脱壳，有利病毒基因组穿入细胞。脊髓灰质炎病毒在细胞质中进行生物合成，装配成完整的病毒体后，通过细胞裂解方式释放。3抵抗力与其他肠道病毒一样，脊髓灰质炎病毒对理化因素的抵抗力较强。在污水和粪便中病毒可存活数月，在胃肠道中能耐受胃酸，蛋白酶和胆汁的作用。脊髓灰质炎病毒对热、干燥较敏感，紫外线和55"C湿热条件下可迅速灭活病毒。含氯(0. lppm)的消毒剂，如次氯酸钠、二氧化氯等对脊髓灰质炎病毒有较好的灭活效果；有机物对病毒有保护作用，对有机物中的病毒灭活时需要提高消毒剂的浓度。


医学微生物学 第二节柯萨奇病毒和埃可病毒 柯萨奇病毒(coxsack比virus,CV)是1948年从纽约州Coxsackie镇临床诊断为脊髓灰质炎的患儿粪便中分离到的一组病毒，分属千甲、乙、丙种肠道病毒(EV-A、B、C，参见表26-1)。埃可病毒(ec hovirus)亦称人肠道致细胞病变孤儿病毒(enteric cytopathogenic human orphan virus, ECHO)，现归属千乙种肠道病毒(EV-B，参见表26-1)。柯萨奇病毒和埃可病毒的形态、生物学性状以及感染过程、免疫特性等均与脊髓灰质炎病毒相似。根据柯萨奇病毒对乳鼠的致病特点和对细胞培养的敏感性不同，可将其分为A、B两组。A组柯萨奇病毒(CVA)有1~22和24等23个血清型，感染乳鼠后引起肌肉松弛型麻痹，部分型别（如Al、Al9和A22)不能在培养细胞中生长；B组柯萨奇病毒(CVB)有1~6等六个血清型，感染乳鼠后引起肌肉痉挛型麻痹，能在多种培养细胞中生长。埃可病毒包括1~9,11~27,29~33等31个血清型。


医学微生物学 第二节柯萨奇病毒和埃可病毒 柯萨奇病毒和埃可病毒的血清型别很多，分布广泛，感染人的机会多。柯萨奇病毒和埃可病毒的受体分布于多种组织和细胞，包括中枢神经系统、心、肺、胰、黏膜、皮肤等，因而引起的疾病谱复杂。柯萨奇病毒和埃可病毒主要通过粪—口途径传播，但也可经呼吸道或眼部黏膜感染。其致病的显著特点是：病毒主要在肠道中增殖，却很少引起肠道疾病；不同的肠道病毒可引起相同的临床疾病，如散发性脊髓灰质炎样麻痹症、无菌性脑膜炎、脑炎、轻型上呼吸道感染等；同—型病毒也可引起几种不同的临床疾病，相关内容的总结见表26-2。